中性粒细胞外陷阱（NETs）杀灭金黄色葡萄球菌及糖皮质激素对其影响的体外研究

发布时间：2017-05-10 12:02

  本文关键词：中性粒细胞外陷阱（NETs）杀灭金黄色葡萄球菌及糖皮质激素对其影响的体外研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 评估中性粒细胞胞外陷阱(NETs)对金黄色葡萄球菌的体外杀灭作用,并探讨糖皮质激素对NETs形成和杀菌效率的影响。 方法： 从健康志愿者外周血中分离出中性粒细胞,加入一定浓度的金黄色葡萄球菌,免疫荧光染色观察不同作用时间的NETs形成,利用IPP显微镜图像分析软件定量测定NETs形成率。通过细胞松弛素D抑制中性粒细胞的吞噬和脱颗粒,测定NETs的杀菌效率；以松弛素D预处理中性粒细胞后再用DNase破坏NETs结构,检测无NETs作用下细菌负荷量,测定NETs杀菌效率,分析NETs形成率和NETs杀菌率之间的相关性。在此基础上使用三种不同浓度的地塞米松(1,10,100μg/ml)处理中性粒细胞,加入金黄色葡萄球菌,以同样方法测定NETs形成和杀菌效率,分析地塞米松对NETs形成率和NETs杀菌率的影响。 结果： 体外中性粒细胞在金黄色葡萄球菌的刺激下形成NETs,中性粒细胞在抗感染过程中吞噬作用和NETs同时存在,NETs的形成率与两者作用时间呈正相关,杀菌率在2小时内呈正相关,DNase水解NETs后杀菌率明显下降。NETs的形成和杀菌率均受地塞米松的影响,中高浓度的地塞米松抑制了NETs的形成和杀菌率。 结论： 金黄色葡萄球菌能诱导中性粒细胞形成NETs,中性粒细胞在抗感染过程中吞噬作用和NETs同时存在,NETs具有优越的抗菌功能。NETs形成率和杀菌率在一定时间内呈正相关；糖皮质激素可能通过抑制NETs的形成从而抑制了中性粒细胞的抗感染作用。
【关键词】：NETs 地塞米松 中性粒细胞 金黄色葡萄球菌
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 缩略词表9-10
• 目次10-12
• 前言12-14
• 1 材料和方法14-22
• 1.1 材料14-16
• 1.1.1 实验试剂14-15
• 1.1.2 实验仪器15-16
• 1.2 方法16-21
• 1.2.1 细菌培养16
• 1.2.2 中性粒细胞分离(不连续的密度梯度血浆-Percoll离心法)16-17
• 1.2.3 金黄色葡萄球菌感染中性粒细胞观察不同作用时间NETs形成率检测17
• 1.2.4 金黄色葡萄球菌感染中性粒细胞观察不同作用时间NETs杀菌率的检测17-18
• 1.2.5 DNA酶(DNase Ⅰ)对NETs形成率的影响18
• 1.2.6 DNA酶(DNase Ⅰ)对NETs形成率的影响18-19
• 1.2.7 地塞米松对中性粒细胞NETs形成率的影响19
• 1.2.8 地塞米松对中性粒细胞NETs杀菌率的影响19-20
• 1.2.9 NETs免疫荧光染色20-21
• 1.3 NETs的定量方法21
• 1.4 统计分析21-22
• 2 结果22-34
• 2.1 Percoll离心法分离中性粒细胞22
• 2.2 中性粒细胞对金黄色葡萄球菌的吞噬作用22-23
• 2.3 NETs免疫荧光染色23-25
• 2.4 DNA酶(Dnase Ⅰ)对NETs的作用25-27
• 2.5 中性粒细胞和金黄色葡萄球菌作用不同时间NETs的形成率和杀菌率27-30
• 2.6 地塞米松对NETs形成率的影响30-33
• 2.7 地塞米松对NETs的杀菌效率的影响33-34
• 3 讨论34-38
• 4 结论38-39
• 参考文献39-42
• 综述42-54
• 参考文献51-54
• 作者简历及在学期间所取得的科研成果54

【共引文献】

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本文编号：354684