MicroRNA-181a调控缺氧/复氧诱导下心肌细胞的凋亡

发布时间：2021-12-30 21:01

　　目的:探讨microRNA-181a（miR-181a）对缺氧/复氧诱导下大鼠心肌细胞株H9c2凋亡的作用。方法:通过生物信息学软件筛选出可调控Bcl-2表达的miRNAs。建立H9c2细胞缺氧/复氧模型,通过Western blot检测Bcl-2蛋白表达变化,荧光定量PCR检测miR-181a表达变化。进一步构建Bcl-2的荧光素酶报告载体,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶的表达变化。采用体外合成的大鼠miR-181a的模拟物（mimic）和抑制剂（inhibitor）,用脂质体转染培养的H9c2细胞48h后,缺氧/复氧处理细胞,实验分为4组:正常对照组（CTL）、缺氧/复氧组（H/R）、缺氧复氧加miR-181a的模拟物组（mimic）、缺氧复氧加miR-181a的抑制剂组（inhibitor）。TUNEL法检测各组细胞凋亡;Western blot分析各组凋亡关键蛋白cleaved caspase-3的表达量的变化。结果:生物学软件预测miR-181a可调控Bcl-2蛋白的表达,在缺氧/复氧模型中Bcl-2蛋白的表达明显下调,而miR-181a的表达上升近4倍。成功构建双荧光酶... 

【文章来源】：临床心血管病杂志. 2015,31(06)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

图１生物学软件预测可能调控Ｂｃｌ－２的ｍｉＲＮＡｓＦｉｇｕｒｅ１ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｏｆｔｗａｒｅｐｒｅｄｉｃｔｓｔｈｅｍｉＲＮＡｓｒｅｇｕｌａｔｅｄ

濒死心肌或缩小心肌梗死范围、保护心功能起了很重要的作用，但灌注损伤的问题也变得越来越突出，引起了人们高度的重视［５］。缺血再灌注损伤的特征性改变是细胞凋亡，细胞凋亡的多少决定着缺血再灌注损伤的轻重，并且对缺血再灌注损伤的预后判断具有重要意义［６－７］。许多研究显示，细胞凋亡的发生机制主要有两条凋亡途径，即Ａ：荧光显微镜下凋亡率，绿色为ＴＵＮＥＬ染色阳性细胞核，蓝色为Ｄａｐｉ标记细胞核。Ｂ：细胞凋亡率的统计图。与ＣＴＬ比较，１）Ｐ＜０．０１。图４Ｈ９ｃ２细胞在进行不同处理后测凋亡率（×２００）ＴＵＮＥＬ及Ｄａｐｉ双染色Ｆｉｇｕｒｅ４Ｔｈｅｒａｔｅｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｕｎｄｅｒｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（×２００）图５ｍｉＲ－１８１ａ模拟物和抑制剂对Ｈ／Ｒ处理Ｈ９ｃ２后凋亡蛋白ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ－３表达的影响Ｆｉｇｕｒｅ５ＥｆｆｅｃｔｏｆｍｉＲ－１８１ａｏｎｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ－３线粒体凋亡途径和死亡受体凋亡途径，目前普遍认为心肌细胞凋亡在很大程度上是通过线粒体凋亡途径，而且线粒体凋亡途径在介导心肌细胞凋·６６７·

缺血再灌注损伤的预后判断具有重要意义［６－７］。许多研究显示，细胞凋亡的发生机制主要有两条凋亡途径，即Ａ：荧光显微镜下凋亡率，绿色为ＴＵＮＥＬ染色阳性细胞核，蓝色为Ｄａｐｉ标记细胞核。Ｂ：细胞凋亡率的统计图。与ＣＴＬ比较，１）Ｐ＜０．０１。图４Ｈ９ｃ２细胞在进行不同处理后测凋亡率（×２００）ＴＵＮＥＬ及Ｄａｐｉ双染色Ｆｉｇｕｒｅ４Ｔｈｅｒａｔｅｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｕｎｄｅｒｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ（×２００）图５ｍｉＲ－１８１ａ模拟物和抑制剂对Ｈ／Ｒ处理Ｈ９ｃ２后凋亡蛋白ｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ－３表达的影响Ｆｉｇｕｒｅ５ＥｆｆｅｃｔｏｆｍｉＲ－１８１ａｏｎｃｌｅａｖｅｄｃａｓｐａｓｅ－３线粒体凋亡途径和死亡受体凋亡途径，目前普遍认为心肌细胞凋亡在很大程度上是通过线粒体凋亡途径，而且线粒体凋亡途径在介导心肌细胞凋·６６７·


本文编号：3558956