乙型肝炎病毒相互作用蛋白编码基因的克隆化及新基因功能的初步研究

发布时间：2022-01-07 10:39

　　乙型肝炎病毒（HBV）感染致肝细胞损伤机制，很大程度上与病毒蛋白和肝细胞蛋白间的相互作用相关。因此，研究HBV各抗原成分与肝细胞内的蛋白相互作用及其机理能在一定程度上对HBV的致病机制做出解释，为寻找有效防治HBV的方法提供新线索。 酵母双杂交技术是一种研究蛋白-蛋白间相互作用的比较快速、可靠并可大规模筛选的方法。本实验所采用酵母双杂交系统-3，利用两种单倍体酵母a和α接合型可以配合形成二倍体，而其中表达的外源蛋白仍能相互作用，免去了低效率文库质粒与诱饵质粒共转染的问题，大大提高了杂交效率；在原技术基础上增加了3个报告基因，降低了假阳性率，保证实验结果的真阳性率达95％。我们利用该技术，根据HBV ayw亚型的基因全序设计引物，多聚酶链反应（PCR）方法扩增所得到前-S2、HBeAg、HBcAg、HBxAg等基因编码序列，经测序鉴定正确分别连接入酵母表达载体pGBKT7中构建“诱饵”质粒，转化酵母细胞AH109（a型）并在其内表达，Western-blotting验证。然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的乙型肝炎病毒相互作用蛋白的克隆化鉴定及新基因功能的初步研究2－103... 

【文章来源】：中国人民解放军医学院北京市

【文章页数】：106 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
主要实验材料及仪器设备
缩写字母中英文全称
前言
第一部分 酵母双杂交筛选肝文库中HBV结合蛋白基因
    “诱饵”载体的构建
    HBV各抗原基因在酵母中的表达
    酵母双杂交筛选
    讨论
第二部分 体外免疫共沉淀实验
    新基因全序的克隆化研究
    体外翻译
    体外免疫共沉淀
    讨论
第三部分 新基因功能的初步研究
    新基因的亚细胞定位
    新基因对哺乳动物细胞生长的影响
    新基因肝细胞内结合蛋白的研究
    新基因的基因芯片研究
    讨论
参考文献
小结
综述一： 乙肝病毒X蛋白功能的研究进展
综述二： 分子伴侣及其与乙型肝炎病毒的关系
攻读博士学位期间发表的论文
致谢



本文编号：3574388