肺炎链球菌免疫小鼠程序的优化及杂交瘤细胞株的建立

发布时间：2022-01-13 09:13

　　目的优化肺炎链球菌CSR SCS2 clone1小鼠的免疫程序,同时建立肺炎链球菌C多糖（C polysaccharides,CPs）杂交瘤细胞株。方法制备免疫抗原CSR SCS2 clonel,进行小鼠免疫程序优化:抗原量[（0. 5～2）×10⁸个、（1～4）×108个、（2. 4～10）×10⁸个)]、免疫间隔时间（3 d、1周、2周）、免疫途径（腹腔、腹股沟及尾静脉）,同时确定抗原是否添加佐剂,间接ELISA法检测小鼠血清抗体水平。采用优化程序免疫小鼠,取血清效价最高的小鼠脾细胞,经传统单克隆抗体制备技术建立肺炎链球菌C-Ps杂交瘤细胞株,并检测细胞株的染色体数目及其分泌抗体的稳定性及特异性。结果确定小鼠最适免疫程序为:抗原量为（1～4）×108个,且需添加弗氏佐剂,免疫间隔时间为1周,免疫途径为腹股沟注射。最适程序免疫小鼠血清抗体效价达1∶12 000以上。建立了3株肺炎链球菌C-Ps杂交瘤细胞,命名为A4、G8、H10株,染色体数目分别为98、102和102,分泌的抗体具有良好的稳定性和特异性。结论成功优化了肺炎链球菌小鼠的免疫程... 

【文章来源】：中国生物制品学杂志. 2019,32(08)CSCD

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 细胞及菌株
    1.2 多糖
    1.3 主要试剂
    1.4 实验动物
    1.5 免疫抗原的制备
    1.6 肺炎链球菌小鼠免疫程序的优化
        1.6.1 抗原量
        1.6.2 免疫间隔时间
        1.6.3 免疫途径
        1.6.4 佐剂
    1.7 小鼠血清抗体效价的检测
    1.8 杂交瘤细胞株的建立
        1.8.1 小鼠免疫
        1.8.2 细胞融合及杂交瘤细胞筛选
        1.8.3 杂交瘤细胞培养上清抗体效价测定
    1.9 杂交瘤细胞株的检定
        1.9.1 杂交瘤细胞分泌抗体的稳定性
        1.9.2 杂交瘤细胞染色体分析
        1.9.3 杂交瘤细胞分泌抗体的特异性检测
    1.1 0 统计学分析
2 结果
    2.1 肺炎链球菌小鼠免疫程序的优化
        2.1.1 抗原量
        2.1.2 免疫间隔时间
        2.1.3 免疫途径
        2.1.4 佐剂
    2.2 免疫小鼠血清抗体效价检测
    2.3 杂交瘤细胞株的建立
        2.3.1 阳性杂交瘤细胞株的筛选
        2.3.2 杂交瘤细胞培养上清抗体效价
    2.4 杂交瘤细胞株的检定
        2.4.1 杂交瘤细胞分泌抗体稳定性
        2.4.2 杂交瘤细胞染色体分析
        2.4.3 杂交瘤细胞分泌抗体的特异性检测
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]分泌抗山羊γ干扰素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备与鉴定[J]. 张洪杰,桑锋锋,刘阿华,李言言,王毅,陈德坤.  动物医学进展. 2017(12)
[2]小龙虾钙结合蛋白的免疫学特性鉴定与单克隆抗体的制备[J]. 陈献雄,邬玉兰,吉琼梅,杨平常,刘志刚.  南昌大学学报(医学版). 2017(02)
[3]A族链球菌多价疫苗的完善制备及其动物免疫保护作用研究[J]. 王家超,袁婷,邹东花,高雪,郭奕阳,李剑,张征峥,杨丽娟,马翠卿.  中国免疫学杂志. 2017(03)
[4]抗羊口疮病毒ORFV118蛋白单克隆抗体的制备、鉴定及其应用[J]. 肖斌,郝文波,杜政伦,廖小青,罗树红.  病毒学报. 2016(03)
[5]免疫佐剂作用机制研究新进展[J]. 刘轶博,耿兴超,汪巨峰,李波.  中国新药杂志. 2015(20)
[6]山羊痘病毒ORF122蛋白杂交瘤细胞的构建及其单克隆抗体的制备[J]. 孙剑峰,杨明,陈伯祥,贺泂杰,李杰.  中兽医学杂志. 2015(10)



本文编号：3586143