靶向神经胶质瘤重组抗体的构建及其体内、外抑瘤实验研究
发布时间：2022-01-13 20:43
异常的表皮生长因子受体（EGFR）表达是包括胶质母细胞瘤（GBM）在内的多种肿瘤的共同特征。因此，EGFR逐渐成为肿瘤治疗的重要靶标。本研究的目的在于制备一种能够靶向EGFR阳性肿瘤细胞，并具有肿瘤细胞抑制功能的抗肿瘤免疫导向重组蛋白。核糖体失活因子LP1具有分子量小（5kDa）和蛋白合成抑制功能，因此本研究选择其作为重组蛋白antiEGFR/LP1的核心元件。本研究将LP1通过柔性连接肽连接至抗EGFR单链抗体序列C末端，通过大肠杆菌原核表达系统对其进行了表达，并利用Ni2+柱对表达获得的重组蛋白进行了复性和纯化。SDS-PAGE和westernblotting分析结果表明，重组蛋白antiEGFR/LP1得到了有效表达；荧光共聚焦和流式细胞术分析结果显示，重组蛋白能够与EGFR阳性细胞U251有效结合且主要集中于细胞膜表面，而在相同作用时间和作用剂量条件下与EGFR阴性细胞Jurkat无结合活性。本研究还通过MTT染色分析了antiEGFR/LP1对U251细胞和Jurkat细胞的抑制作用。实验结果表明，antiEGFR/LP1能够有效抑制EGFR阳性细胞U251的增殖，且作用时间...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：142 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
1免疫毒素的作用机理Figure1.2.1Mechanismofactionofimmunotoxins表1.2.1免疫毒素的分类Table1.2.1Classificationoftoxins毒素来源机制结构
ta c a tg ga g c tg a gc a gg c tg a ca tc tg a c ga c a c gg c cg ta ta tt a ct gt gc a a tt c c cc t gg g g c ca a g gg a c a a tg g tc a cc g tc tc tt c a g c ct cc a c c a a gg g c c c a tc g g tc tt c c c cg c gg g cc g c a ga a ca a a a a ct ca tc tc a g a a ga gg a tc tg a a tg g g gc c g ca ta g G G A G G T G G A G G T T C AG G A G G T G G AG G T T CA T C T A G AG AT A T C G TC A C C A CT A A T A G TG AG C G G CC G C 基 因 的合 成 1 基 因序 列 （ AF 5 3 7 3 45 ）、 连接 肽 序及 H I S ta g 序 列的 基 因片 ， 并 连 接至 pG H 载体 ，命 名 为 pG H - L P1 。 LP 1 基因 序列 如 下 A cc a c gg a c c ga g ta tg a gg c gt g tc g a gt tc ga tg c c a a gt g gc g g a gc a tg gg g tg ga c tg tg a ga a gc g gc tg a g gg a gc g a ga g gg c c gg c gg a g G T C G AC CA CC A C Ca G C G G CC G C -a n ti E G FR /L P 1 的构 建I/ S a l I 分 别 双 酶 切 质 粒 pG H - L P1 和 pG H - EG F R ， 并 将 LP 1 基pG H - E G FR 载体 ，构 建 中间 重 组质 粒 pG H -a n ti E G FR /L P 1 （图
图 2 .1 .2 pE T - a nt i E G F R/ L P1 质 粒 构建 图 Fi g u re 2 .1 .2 T he co n s tr u ct io n of th e pl a s m id pE T- a nt i E G F R/ L P- E G FR 的构 建I/ N ot I 分 别 双 酶 切质 粒 pG H -E G F R 和 pE T 2 8a (+ )， 并 将 a nt i E G 接 至经 双 酶切 的 pE T 2 8a (+ ) 载体 ， 构建 原 核表 达 质粒 pE T - E G F- L P 1 的构 建I/ N o t I 分 别 双 酶 切 质 粒 pG H -L P1 和 pE T 2 8a ( + )， 并 将 LP 1 基 pE T 2 8 a (+ )载 体 ，构 建 原 核表 达 质粒 pE T- L P 1 （ 图 2 .1 .4 ）。 -a n ti E G FR /E G F P 的构 建I/ S a l I 分别 双酶 切 质粒 pG H - EG F R 和 pV A X 1 -E G F P ，并将 EG F 切 的 pG H -E G F R 载 体 ，构 建 中间 重 组质 粒 pG H - a n ti E G FR /E G F- a nt i E G F R/ E G FP 的构 建 I/ N o t I 分 别 双 酶 切 质 粒 pG H - a n ti E G FR /E G F P 和 pE T 2 F P 片 段 连 接 至 经 双 酶 切 的 pE T 2 8 a ( + ) 载 体 ， 构 建 原
【参考文献】：
期刊论文
[1]汉坦病毒S0.7基因新型重组腺病毒的构建及鉴定[J]. 李凯,李璞媛,白文涛,胡刚,吴兴安,徐志凯,张芳琳. 细胞与分子免疫学杂志. 2010(05)
本文编号：3587115
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：142 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
1免疫毒素的作用机理Figure1.2.1Mechanismofactionofimmunotoxins表1.2.1免疫毒素的分类Table1.2.1Classificationoftoxins毒素来源机制结构
ta c a tg ga g c tg a gc a gg c tg a ca tc tg a c ga c a c gg c cg ta ta tt a ct gt gc a a tt c c cc t gg g g c ca a g gg a c a a tg g tc a cc g tc tc tt c a g c ct cc a c c a a gg g c c c a tc g g tc tt c c c cg c gg g cc g c a ga a ca a a a a ct ca tc tc a g a a ga gg a tc tg a a tg g g gc c g ca ta g G G A G G T G G A G G T T C AG G A G G T G G AG G T T CA T C T A G AG AT A T C G TC A C C A CT A A T A G TG AG C G G CC G C 基 因 的合 成 1 基 因序 列 （ AF 5 3 7 3 45 ）、 连接 肽 序及 H I S ta g 序 列的 基 因片 ， 并 连 接至 pG H 载体 ，命 名 为 pG H - L P1 。 LP 1 基因 序列 如 下 A cc a c gg a c c ga g ta tg a gg c gt g tc g a gt tc ga tg c c a a gt g gc g g a gc a tg gg g tg ga c tg tg a ga a gc g gc tg a g gg a gc g a ga g gg c c gg c gg a g G T C G AC CA CC A C Ca G C G G CC G C -a n ti E G FR /L P 1 的构 建I/ S a l I 分 别 双 酶 切 质 粒 pG H - L P1 和 pG H - EG F R ， 并 将 LP 1 基pG H - E G FR 载体 ，构 建 中间 重 组质 粒 pG H -a n ti E G FR /L P 1 （图
图 2 .1 .2 pE T - a nt i E G F R/ L P1 质 粒 构建 图 Fi g u re 2 .1 .2 T he co n s tr u ct io n of th e pl a s m id pE T- a nt i E G F R/ L P- E G FR 的构 建I/ N ot I 分 别 双 酶 切质 粒 pG H -E G F R 和 pE T 2 8a (+ )， 并 将 a nt i E G 接 至经 双 酶切 的 pE T 2 8a (+ ) 载体 ， 构建 原 核表 达 质粒 pE T - E G F- L P 1 的构 建I/ N o t I 分 别 双 酶 切 质 粒 pG H -L P1 和 pE T 2 8a ( + )， 并 将 LP 1 基 pE T 2 8 a (+ )载 体 ，构 建 原 核表 达 质粒 pE T- L P 1 （ 图 2 .1 .4 ）。 -a n ti E G FR /E G F P 的构 建I/ S a l I 分别 双酶 切 质粒 pG H - EG F R 和 pV A X 1 -E G F P ，并将 EG F 切 的 pG H -E G F R 载 体 ，构 建 中间 重 组质 粒 pG H - a n ti E G FR /E G F- a nt i E G F R/ E G FP 的构 建 I/ N o t I 分 别 双 酶 切 质 粒 pG H - a n ti E G FR /E G F P 和 pE T 2 F P 片 段 连 接 至 经 双 酶 切 的 pE T 2 8 a ( + ) 载 体 ， 构 建 原
【参考文献】：
期刊论文
[1]汉坦病毒S0.7基因新型重组腺病毒的构建及鉴定[J]. 李凯,李璞媛,白文涛,胡刚,吴兴安,徐志凯,张芳琳. 细胞与分子免疫学杂志. 2010(05)
本文编号：3587115
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