小鼠小肠上皮细胞间淋巴细胞（iIEL）与脾T淋巴细胞间基因表达差异的分析与iIEL功能初步研究

发布时间：2022-01-14 05:41

　　小肠上皮细胞间的淋巴细胞（intestine intraepithelial lymphocytes，iIEL）是位于小肠绒毛柱状上皮细胞间的一类组织松散的浸润淋巴细胞。它们在粘膜免疫防御和口服免疫耐受形成等方面起着重要的作用。它们在形态、表型、起源、发育、以及功能上与传统部位（脾和淋巴结等）的淋巴细胞有所不同，而这种差异的本质应该存在着相应的分子基础。本研究旨在比较小鼠iIEL与脾脏T淋巴细胞的基因表达差异，初步解释上述基因表达差异之特点；并且对iIEL进行了初步的研究，以期为阐明iIEL结构与功能特征提供资料与依据。 首先，通过建立iIEL与脾脏T淋巴细胞的cDNA差异减除文库，来比较两者的基因表达差异并初步分析iIEL优势表达的基因。我们采用percoll密度梯度法分离iIEL，尼龙毛柱法分离脾脏T淋巴细胞，两者的纯度都在90％以上。应用改良后的差减杂交法，在消化后的cDNA两端连接特异的衔接子，通过减除杂交从iIEL中去除与脾T淋巴细胞相同的表达基因，再经抑制性PCR扩增，并与质粒载体连接，得到二者的cDNA减除文库。用反向Northern blot初步筛选出iIEL优势... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

ESTDNA序列用BLAST系统进行比对分析

中目协和医科大学博士学位伦文3.iIEL中TCRap十和TCRY6+T细胞的分选用FITC标记的抗TCR一a口单抗和PE标记的抗TCR一Y6的单抗与IiEL相互作用，经流式细胞分选仪分选。结果显示，在IiEL中，TCR+和TCRv己+T细胞的比例分别为33%和51%(图1IB);分选的TCR+和TCRv6+T细胞的纯度分别可达97%和99%(图1IC和图1ID)。

B图13LPS和鞭毛蛋白对IiEL的体外促增殖作用ofiIELtoLPSandflagellininvitroB:FIagellindilutedinto60林g/ml，l卜g/ml，0.1林g/mland0.01拼留mlresPeetive!y.6林g/，nl，0.6抖g/mland0.06林g/mlresPeetivelyFig13ProliefrativeresPonseA:LPSwasdilutedinto10林9/1。!，

【参考文献】：
期刊论文
[1]肠出血性大肠杆菌O157:H7脂多糖抗原的制备及鉴定[J]. 潘劲草,黄志成,余文炳,李学梅.  中国人兽共患病杂志. 1999(03)



本文编号：3587920