破骨细胞分化中NFATc1/miR-125a作用通路的研究

发布时间：2022-02-17 16:43

　　目的研究破骨细胞分化中miR-125a受转录因子NFATc1的调控模式及其作用机制,寻找骨代谢疾病新的治疗靶点。方法单核细胞集落刺激因子（M-CSF）和核因子-κB配体的受体激活剂（RANKL）诱导CD₁₄⁺外周血单核细胞（PBMCs）向破骨细胞分化。生物信息学运算预测结合于miR-125a启动子区域的转录因子,过表达实验和抑制实验用于研究转录因子对miR-125a在破骨细胞分化中表达的影响,荧光素酶报告基因实验验证miR-125a与其靶基因之间的结合,凝胶迁移电泳实验（EMSA）和染色质免疫沉淀实验（CHIP）验证转录因子与miR-125a启动子区域的结合。结果凝胶迁移电泳和染色质免疫沉淀实验证明了NFATc1结合于miR-125a的启动子靶位点。过表达NFATc1抑制miR-125a的表达;抑制NFATc1的表达则升高miR-125a的表达。结论 miR-125a在作用于其靶基因——肿瘤坏死因子受体相关因子（TRAF）6的同时受到转录因子NFATc1的负反馈调控,发挥其在破骨细胞分化中的调控作用。表明通过调控NFATc1的表达来改变miR... 

【文章来源】：疑难病杂志. 2015,14(03)

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 实验方法
        1.2.1外周血单核细胞的培养:
        1.2.2 破骨细胞分化:
        1.2.3 实时定量PCR分析:
        1.2.4 miR-125a转录因子预测:
        1.2.5 质粒构建与转染:质粒构建方法按参考文献
        1.2.6 凝胶迁移电泳实验(EMSA):
        1.2.7 染色质免疫沉淀实验(CHIP):
        1.2.8 小分子干扰RNA(siRNA)的制备和转染:
    1.3 统计学方法
2 结果
    2.1 NFATc1与miR-125a的结合位点
    2.2 NFATc1对miR-125a转录的影响
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]miR-125a/TRAF6调控通路在破骨细胞分化中的作用研究[J]. 杨丽,赵新兰,雷丹丹,廖斌,秦爱平.  疑难病杂志. 2014(11)
[2]Biogenesis of Mammalian MicroRNAs:A Global View[J]. Paul Graves.  Genomics, Proteomics & Bioinformatics. 2012(05)



本文编号：3629756