基因工程抗HER2/neu ×抗CD16双特异性抗体的构建、表达及其功能的初步研究

发布时间：2022-02-21 02:04

　　双特异性抗体（bispecific antibody，BsAb）是增强以抗体为基础的肿瘤免疫治疗效果的发展方向之一。BsAb含有两种特异性抗原结合位点，能在肿瘤细胞和免疫效应细胞之间架起桥梁，触发细胞毒反应，产生导向性的杀伤肿瘤效应功能。本研究采用基因工程方法构建了抗HER2／neu×抗CD16 BsAb，并对其抗原结合特性及杀伤HER2／neu过表达肿瘤细胞功能进行了初步研究。本研究分四个部分。1 抗人CD16单克隆抗体可变区基因的克隆、表达及免疫学特性分析采用5’-RACE（rapid amplification of cDNA end，RACE）克隆策略，从分泌抗人CD16单抗的杂交瘤细胞B88-9获得了抗人CD16单抗的重、轻链可变区（VH、VL）及前导肽序列。采用重叠延伸拼接法，通过PCR将VH、VL和Linker Peptide（连接肽）序列在基因水平上拼接，直接合成scFv基因；scFv与人IgG1 Fc区基因片段插入载体pCI-neo构建了scFv-Fc融合蛋白表达载体并在CHO细胞中进行了表达。通过G418筛选获得稳定高表达克隆。更换无血清培养基培养，经重组蛋白A亲和... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：66 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 抗人CD16单克隆抗体可变区基因的克隆、表达及免疫学初步特性分析
    1.1 材料与方法
    1.2 结果
    1.3 讨论
第二部分 抗人HER2／neuscFv-Fc融合蛋白的表达及免疫学特性分析
    2.1 材料与方法
    2.2 结果
    2.3 讨论
第三部分 “杵臼结构”修饰CH3结构域构建抗HER2／neu×抗CD16双特异性抗体
    3.1 材料与方法
    3.2 结果
    3.3 讨论
第四部分 三价双特异性抗体的设计及构建
    4.1 材料与方法
    4.2 结果
    4.3 讨论
结论
参考文献
文献综述
致谢
附录Ⅰ 缩写词表
附录Ⅱ 发表文章



本文编号：3636272