肺炎克雷伯菌产CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶的基因环境研究

发布时间：2022-05-02 23:29

　　目的为研究肺炎克雷伯菌产CTX-M-14型ESBL基因的基因环境及其传播机制。方法本试验对产CTX-M-14型ESBL基因进行质粒接合传递试验;对阳性接合子进行质粒抽提并酶切,PBR322载体连接并转化,将转化子进行测序,进行Blast比对研究基因环境。结果质粒接合试验表明,产CTX-M-14型ESBL基因的阳性菌株能通过质粒接合试验传递耐药性,CTX-M-14基因可经质粒传递,接合子的耐药表型与供体菌基本一致,具有与供体菌相似的耐药表型,仅个别药物的MIC值较供体菌有所降低。在含头孢噻肟平板上筛选的含CTX-M-14基因的阳性转化子对头孢噻肟耐药,而对其它大多数药物表现敏感。产CTX-M-14型ESBL基因的基因环境表明,阳性转化子含有2 637 bp的目的基因序列,经Blast比对,该转化子序列的基因环境结构元件包括上游插入序列ISEcp1、-35区和-10区、重复序列IRR、876 bp的CTX-M-14基因开放阅读框及下游插入序列IS903和IRL,上传NCBI获基因序列号为HQ650134。结论产CTX-M-14型ESBL菌株的耐药情况较严重,临床菌可通过接合方式编码ESBL... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材 料
        1.1.1 菌株来源
        1.1.2 培养基
        1.1.3 药物
        1.1.4 试剂
        1.1.5 仪器
    1.2 方 法
        1.2.1 CTX-M-14型ESBL基因的质粒接合传递试验
            1.2.1.1 供体菌(标号F1)与受体菌(E. coli C600)接合
            1.2.1.2 阳性接合子的筛选与确认
            1.2.1.3 阳性接合子的的MIC值检测
            1.2.1.4 阳性接合子的PCR检测
        1.2.2 CTX-M-14型ESBL的基因环境
            1.2.2.1 接合子质粒双酶切
            1.2.2.2 PBR322克隆载体双酶切
            1.2.2.3 连接转化
            1.2.2.4 阳性转化子的筛选及双酶切鉴定
            1.2.2.5 阳性转化子的MIC值检测
            1.2.2.6 核苷酸序列测定与分析
            1.2.2.7 CTX-M-14型基因上下游分析
2 结 果
    2.1 质粒接合传递试验结果
    2.2 接合子质粒及PBR322载体双酶切结果
    2.3 阳性转化子双酶切鉴定结果
    2.4 耐药表型的测定结果
    2.5 转化子核苷酸序列测定结果
    2.6 含CTX-M-14型ESBL的基因上下游分析
3 讨 论


【参考文献】：
期刊论文
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[10]中国部分地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶基因型研究[J]. 季淑娟,顾怡明,谭文涛,王丹丹,冯羡菊,周志慧,俞云松,陈亚岗,李兰娟.  中华检验医学杂志. 2004(09)



本文编号：3650172