巨噬细胞的TLR3信号调控及极化的机制研究

发布时间：2022-07-22 20:05

　　巨噬细胞是一类分布广泛的吞噬细胞,由血液循环系统中的单核细胞迁移至组织处分化而来,是固有免疫的重要组成成员。巨噬细胞上表达多种Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）,能识别来自不同病原微生物上的病原体相关分子模式（Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）,并能迅速有效得做出反应,清除病原体,参与机体抵抗感染的第一道防线。同时,清除病原体的过程又不可避免会伴随炎症反应。而巨噬细胞是最先与病原体发生接触的细胞之一,因此,巨噬细胞又是一类非常重要的炎症细胞,能够介导并促进炎症反应,其过度活化会引起炎症的调控失衡,使生理性炎症反应转变为病理性的免疫损伤,从而导致多种炎症性疾病,如脓毒症。在巨噬细胞表达的多种TLRs,以TLR4介导的巨噬细胞炎性活化研究最为广泛,有多种针对TLR4的脓毒症药物都用于临床实验,但都因效果不佳或副作用太大而被撤销。因此,研究的目光开始转向到位于内体的TLR3上。TLR3是一种核酸感受器,它可以识别来自病毒或宿主细胞的双链RNA（Double-strained RNA, dsRNA）和模拟物... 

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摘要
ABSTRACT
第一章 外源小分子FC-99干预可抑制TLR3介导的巨噬细胞炎症反应
    1.1 前言
        1.1.1 Toll-like receptor及其相关通路
        1.1.2 TLR3信号通路
        1.1.3 TLR3与炎症
    1.2 实验材料
        1.2.1 实验对象
        1.2.2 主要实验试剂
        1.2.3 主要实验仪器
    1.3 实验方法
        1.3.1 FC-99的配置
        1.3.2 小鼠腹腔巨噬细胞的获取
        1.3.3 细胞活力的检测
        1.3.4 Poly(I：C)摄取能力的检测
        1.3.5 酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎性因子蛋白水平
        1.3.6 荧光定量PCR分析炎性因子mRNA水平
        1.3.7 Western blot检测蛋白表达水平
        1.3.8 数据分析统计
    1.4 结果
        1.4.1 FC-99不影响腹腔巨噬细胞的细胞活力
        1.4.2 FC-99不影响巨噬细胞对外源性poly(I：C)的摄取
        1.4.3 FC-99抑制poly(I：C)诱导的巨噬细胞炎性反应
        1.4.4 FC-99抑制TLR3介导的MAPK/NF-KB信号通路
    1.5 讨论
    1.6 参考文献
第二章 FC-99通过IRF3/IFN-α/JAK/STAT1通路降低TLR3的表达
    2.1 前言
        2.1.1 TLR3的过度表达与活化加剧病毒诱导的炎症损伤
        2.1.2 TLR3参与介导自身免疫病的发生
        2.1.3 TLR3介导了系统性炎症的发生与发展
        2.1.4 IFN-α通路参与诱导TLR3的表达
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验对象
        2.2.2 主要实验试剂
        2.2.3 主要实验器材
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞系培养
        2.3.2 腹腔巨噬细胞的获取
        2.3.3 小鼠骨髓来源DCs的获取
        2.3.4 小鼠脾脏细胞的获取
        2.3.5 流式细胞术检测巨噬细胞TLR3的表达
        2.3.6 IFNAR1干扰技术
        2.3.7 数据分析统计
    2.4 结果
        2.4.1 FC-99抑制poly(I：C)诱导的TLR3表达
        2.4.2 FC-99对TLR3的抑制作用不具有细胞依赖性
        2.4.3 Poly(I：C)诱导TLR3的表达依赖于Ⅰ型干扰素
        2.4.4 FC-99通过IRF3抑制Ⅰ型干扰素的表达
        2.4.5 FC-99通过JAK/STAT1抑制IFN-α诱导的TLR3
    2.5 讨论
    2.6 参考文献
第三章 FC-99通过诱导PPAR-γ促进巨噬细胞M2型极化
    3.1 前言
        3.1.1 炎症与巨噬细胞极化
        3.1.2 巨噬细胞M2型极化的分子机制
        3.1.3 M2型巨噬细胞与疾病
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验对象
        3.2.2 主要实验试剂
        3.2.3 主要实验仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 巨噬细胞极化的诱导
        3.3.2 STAT6干扰实验
        3.3.3 流式细胞术检测M2表面标记Mrc(CD206)
        3.3.4 Q-PCR技术、ELISA与Western blot
        3.3.5 数据分析统计
    3.4 结果
        3.4.1 M1、M2的表型鉴定
        3.4.2 FC-99诱导M1向M2的转化并促进IL-4诱导的M2型基因的表达
        3.4.3 FC-99促进M2型巨噬细胞相关基因的表达
        3.4.4 FC-99不通过STAT6诱导Mrc的表达
        3.4.5 FC-99通过PPAR-γ诱导Mrc的表达
    3.5 讨论
    3.6 参考文献
第四章 TLR3的降低与巨噬细胞M2型极化有助于缓解CLP诱导的小鼠脓毒症
    4.1 前言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验对象
        4.2.2 主要实验试剂
        4.2.3 主要实验仪器
    4.3 实验方法
        4.3.1 盲肠结扎穿孔(CLP)诱导小鼠脓毒症
        4.3.2 生化指标的检测
        4.3.3 血清炎性因子的检测
        4.3.4 流式细胞术检测TLR3的表达
        4.3.5 细胞凋亡的检测
        4.3.6 小鼠血液和腹腔液细菌集落培养
        4.3.7 器官组织的HE染色
        4.3.8 器官组织中TLR3表达的检测
        4.3.9 小鼠存活率实验
        4.3.10 数据分析统计
    4.4 结果
        4.4.1 FC-99减轻CLP诱导的器官功能障碍与损伤
        4.4.2 FC-99缓解CLP诱导的急性肺损伤
        4.4.3 FC-99降低CLP诱导的小鼠系统性炎症反应
        4.4.4 FC-99降低CLP诱导的细胞凋亡并增强细菌清除
        4.4.5 FC-99抑制CLP诱导的小鼠死亡率
        4.4.6 FC-99抑制脓毒症小鼠TLR3在系统及局部的表达
        4.4.7 FC-99干预肝脏巨噬细胞的极化
    4.5 讨论
    4.6 参考文献
结论
博士研究生期间发表及待发表论文列表
致谢



本文编号：3665255