重组人生长激素促进颌骨缺损修复的实验研究

发布时间：2017-05-15 04:07

  本文关键词：重组人生长激素促进颌骨缺损修复的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 肿瘤、外伤、炎症以及先天性因素等各种各样的原因均可以造成不同程度的颌骨缺损，进而导致患者丧失了咀嚼、语言功能，影响义齿的修复和患者的生活质量。目前如何通过促进骨组织的形成来修复颌骨缺损是研究的难点和热点问题。1958年人们发现可以将人生长激素(human growth hormone, hGH)用于治疗侏儒症，但是由于当时仅仅能够从尸体的脑垂体中提取出人生长激素，数量有限，难以保证临床用量，而限制了其应用。1986年波耶尔通过基因重组的技术成功的合成了重组人生长激素(recombinant human growth hormone, rhGH)，其结构与人垂体分泌的生长激素完全相同，这样便实现了重组人生长激素的大规模生产和应用。重组人生长激素经皮下注射具有促进生长发育、促进创面愈合的作用；在临床上已经广泛应用于预防和治疗因生长激素缺乏导致的儿童生长发育迟缓、呆小症、老年人免疫功能的低下、手术或烧伤患者的创面愈合迟缓等。成骨细胞表面能够表达生长激素受体，有学者据此推测重组人生长激素可能通过调节成骨细胞表面受体的表达来影响成骨细胞的成骨和破骨功能，进而参与骨重建。从而对此展开研究，研究发现重组人生长激素具有体外促进成骨细胞的增殖和提高碱性磷酸酶活性的作用，对成骨细胞的合成代谢有直接的影响。本实验将重组人生长激素应用于颌骨缺损的大鼠模型，通过大体标本肉眼观察、组织形态学检测以及血清学研究，旨在判断重组人生长激素对成骨细胞活性的影响，进而推测重组人生长激素在颌骨缺损修复过程中的作用，为重组人生长激素将来能够应用于口腔领域促进颌骨成骨提供理论依据；同时通过比较腹部皮下用药与缺损区域局部用药的差异，确定重组人生长激素的最佳给药途径。 材料和方法： 本研究主要通过动物实验及血清学研究实现。实验主要分为三个部分：下颌骨部分缺损模型的建立，应用重组人生长激素注射，检测成骨相关的指标。以60只雄性Wistar大鼠为实验对象随机建立双侧下颌骨缺损模型，随机分为实验1组24只、实验2组24只。实验1组缺损区局部注射重组人生长激素，实验2组腹部皮下注射等量重组人生长激素。另设12只为对照组，对照组局部注射等体积生理盐水。分别于给药结束后2周、4周、6周随机抽取实验1组8只，实验2组8只，对照组4只处死，测定相应的成骨指标。 一般状况及大体标本肉眼观察：术后观察实验动物的一般情况，包括毛色、进食、体重以及活动的状况；创口是否红肿，有无溢脓、窦道出现；有无继发性骨折。肉眼观察大体标本炎症状况，软组织附着情况，缺损区骨生长情况：包括缺损区域的大小、新生骨的颜色、排列及骨质致密程度。组织学光镜下观察骨缺损区新骨生长情况，纤维组织长入情况，骨缺损区周围有无炎症细胞浸润，骨小梁排列情况，新骨成熟程度等。血清中碱性磷酸酶活性检测。 结合肉眼观察、组织形态学观察及血清中碱性磷酸酶活性检测结果，评价重组人生长激素对于颌骨缺损修复是否具有促进作用。 结果： 一般状况:术后所有大鼠生命体征平稳，毛色及活动基本正常。术后当日即可进少量的食物，术后的第2天进食及活动恢复正常；手术创口愈合良好，未见明显红肿、化脓，术后1周左右大部分缝线自行脱落；动物均存活至取材的时间，这期间下颌术区未见明显红肿等炎性反应。 肉眼观察：给药结束后第2周末：局部炎症反应不明显，骨缺损区范围减小不明显，实验1组与实验2组无明显差异，同期对照组无明显变化。给药结束后第4周末：实验1组与实验2组缺损区范围均较给药结束后第2周末明显减小，可见明显新生骨，色白，微透明，质地较韧，探针不易探入。对照组缺损区减小不明显。给药结束后第6周末：实验1组缺损区被大量新生骨所充填，形态不规则，表面不平整，质地较硬，探针不能探入，中央覆盖少量软组织，，边缘为硬组织；实验2组与实验1组无明显差异；对照组缺损区范围有所减小，周围可见少量新生骨。 组织形态学观察：HE染色镜下观察，给药结束后第2周末：实验1组骨缺损区明显可见，边缘可见新骨形成，大量纤细的骨小梁，大致呈网状，排列紊乱，成骨细胞形态典型，可见少量巨噬细胞。高倍镜下靠近缺损边缘处，成骨细胞分化明显，但数目较少；实验2组与实验1组差异不明显；对照组缺损清晰可见，缺损区边缘成骨较少，偶见新生骨小梁。给药结束后第4周末：实验1组骨缺损区边缘可见大量的新生骨，新生骨主要为骨小梁，增粗、成团的骨小梁排列紊乱，骨小梁内部有骨细胞的形成，存在于骨陷窝内，骨小梁的周边有成排的成骨细胞；实验2组与实验1组差异不明显；对照组骨缺损区边缘有新骨形成，新生骨小梁数量少，分布较为分散。给药结束后第6周末：实验1组骨缺损区中央大部分被新生骨充填，可见大范围的新生骨，新生骨小梁进一步增粗、成团，骨基质样团块组织形成，其间骨小梁形态不明显，可见部分骨陷窝内出现骨细胞，成骨细胞形态典型；实验2组：与实验1组差异不明显；对照组：缺损区边缘可见大量新生骨，骨小梁成团块状，排列紊乱，与正常骨组织界限清楚。 血清中碱性磷酸酶活性检测：给药结束后第2周，4周各实验组均明显高于对照组，差异有统计学意义(P0.05)；6周时各实验组与对照组之间没有统计学差异(P0.05)。各组给药结束后第4、6周较第2周下降，各组内不同时间点血清ALP值比较均有显著性意义(P=0.00)，表明各时间点间成骨不同，早期成骨活跃。 结论： 一、rhGH通过增强成骨细胞活性，使骨缺损区成骨活跃，促进新骨成熟，在颌骨缺损修复过程中具有促进成骨的作用。 二、rhGH经局部注射在用药早期效果优于腹部皮下注射。
【关键词】：重组人生长激素 颌骨缺损 骨组织再生
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R782.4;R-332
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-14
• 第1章 前言14-17
• 第2章 材料和方法17-22
• 2.1 材料17-18
• 2.1.1 实验动物17
• 2.1.2 主要仪器设备17
• 2.1.3 材料、试剂和药物17-18
• 2.2 方法18-22
• 2.2.1 实验动物选择和分组18
• 2.2.2 取血18
• 2.2.3 颌骨缺损模型的制备18-19
• 2.2.4 动物处死及标本采集19-20
• 2.2.5 组织学标本制备20
• 2.2.6 HE 染色20-21
• 2.2.7 血清中碱性磷酸酶活性检测21-22
• 第3章 结果22-29
• 3.1 临床一般状况观察22
• 3.2 肉眼观察22-23
• 3.3 组织形态学观察23-26
• 3.4 血清中碱性磷酸酶活性26-29
• 第4章 讨论29-39
• 4.1 颌骨缺损修复方法29-31
• 4.2 RHGH 的相关研究31-34
• 4.3 RHGH 对颌骨缺损修复的影响34-39
• 第5章 结论39-40
• 参考文献40-45
• 综述45-52
• 参考文献49-52
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果52-53
• 致谢53

【参考文献】

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1 李刚;李爽;杨静;王军;郭晖;雷伟;廖Z

本文编号：366846