流感减毒活疫苗诱发黏膜IgA抗体间接ELISA检测方法的优化及其实验室内控品的制备

发布时间：2022-11-01 22:07

　　目的优化流感减毒活疫苗诱发黏膜IgA抗体的ELISA检测方法,并制备IgA抗体实验室内控品。方法采用ELISA检测法对流感病毒抗原（全病毒及其相应HA抗原）及包被浓度（0. 5、1、2、4μg/mL）、封闭液（1%BSA、10%FBS、5%脱脂奶粉）及封闭时间（1、1. 5、2 h）、样本稀释液（含1%BSA的PBST、含2%脱脂奶粉的PBST、样本保存液）及样本作用时间（45、60、75 min）、酶标抗体稀释度（1∶1 000、1∶2 000、1∶4 000、1∶8 000）进行优化。采用优化的方法制备针对H1N1、H3N2和B型3个型别流感病毒的IgA抗体检测用实验内控品,并用该方法对接种三价流感减毒活疫苗的20名志愿者的鼻咽拭子样本进行检测。结果最适间接ELISA法检测条件为:以全病毒作为包被抗原,包被浓度为1μg/mL;以含1%牛血清白蛋白为封闭液封闭2 h;样本稀释液为2%脱脂奶粉的PBST,作用时间为60 min;酶标抗体稀释度为1∶1 000。采用优化方法制备的H1N1、H3N2、B型IgA抗体阳性实验室内控品几何平均滴度分别为23、45、35,可接受范围分别为16～3... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病毒
    1.2 样本
    1.3 主要试剂
    1.4 方法的建立
    1.5 反应条件的优化
        1.5.1 包被抗原的确定
        1.5.2 包被抗原浓度的确定
        1.5.3 封闭液的确定
        1.5.4 封闭时间的确定
        1.5.5 样本稀释液的确定
        1.5.6 样本孵育时间的确定
        1.5.7 酶标二抗稀释度的确定
    1.6 实验室内控品的制备
    1.7 方法的初步应用
    1.8统计学分析
2 结果
    2.1 最适反应条件
        2.1.1 最适包被抗原
        2.1.2 最适抗原包被浓度
        2.1.3 最适封闭液
        2.1.4 最适封闭时间
        2.1.5 最适样本稀释液
        2.1.6 最适样品孵育时间
        2.1.7 最适酶标二抗稀释度
    2.2 实验室内控品标定结果
    2.3 方法的初步应用
3 讨论



本文编号：3700185