Mac-1-FP融合蛋白的构建、表达、鉴定及其在细胞内走向的探讨

发布时间：2022-12-07 20:38

　　Mac-1（CD11b/CD18）为位于白细胞表面的整合素家族粘附分子之一，它是白细胞游走、趋化、吞噬的基础，在机体防御作用及免疫反应过程中起着极为重要的作用。然而，迄今为止，尽管白细胞活化后Mac-1如何参与粘附的研究已相当深入，但关于Mac-1在白细胞脱粘附中的作用及其机制则研究得还很少；对于Mac-1的贮存、转位、变构的过程，尚缺乏在一个细胞对其全过程进行动态定位定量的研究；对不同的激动剂引起的Mac-1的活化过程，还只是一个统一的笼统的模式。为此，本课题拟对Mac-1在细胞内的走向进行研究。 以往文献上研究Mac-1的贮存、转位以及内吞的方法，主要采用的是抗体标记Mac-1，用流式细胞术测定或免疫组化技术显微镜下直接观察Mac-1的细胞内分布，但其缺点是不可能在单细胞、活细胞连续地观察，如果要研究在细胞内的走向则还需要使细胞表面通透性增高（permeabilize）,这就难免干扰了细胞的静态及生理过程。我们决定尝试采用绿色荧光蛋白（GFP）标记Mac-1形成融合蛋白的方法，研究其细胞内定位和细胞内的走向。 首先，为了更全面更明确地了解Ma... 

【文章页数】：93 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
缩略语表
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英文摘要
前言
第一部分 Mac-1－FP融合蛋白的构建、表达与鉴定
    实验设计
    一、 Mac-1－FP融合基因的构建
        1、 材料与方法
        2、 结果与讨论
    二、 Mac-1－FP在细胞株中的表达与鉴定
        （一） CD11b-BFP、YFP-CD18在U937细胞株中的表达与鉴定
            1、 材料与方法
            2、 结果与讨论
        （二） CD11b-BFP、YFP-CD18在CHO细胞株中的表达与鉴定
            1、 材料与方法
            2、 结果与讨论
    结论与展望
第二部分 PMA和ICAM-1作用后Mac-1－FP融合蛋白在细胞内走向的探讨
    概述
    一、 材料与方法
    二、 结果
        （一） PMA活化前后Mac-1-FP的变化
            1、 免疫组化实验结果
            2、 激光共聚焦显微镜观测结果
        （二） Mac-1-FP与ICAM-1包被磁珠结合后的变化
            1、 ICAM-1包被磁珠与Mac-1-FP-CHO细胞粘附结果
            2、 激光共聚焦显微镜观测
    三、 讨论
结论
参考文献
文献综述
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]山莨菪碱（654-2）抗休克作用的实验研究[J]. 陈祥银,严仪昭,西品香.  中国医学科学院学报. 1987(04)



本文编号：3712803