表皮干细胞建系及重建角膜缘干细胞缺损眼表研究

发布时间：2023-01-12 13:24

　　自Bikenbach（1981）首次标记小鼠皮肤干细胞以来的二十余年间，科学家们对表皮干细胞进行了大量研究，但至今没有建立起表皮干细胞系的报道，从而制约了表皮干细胞研究的深入进行。开展分离纯化表皮干细胞建系及生物学特性研究，为表皮干细胞应于医学临床的组织工程及人类重大疾病的细胞治疗打下技术基础。该项研究不仅具有重要的理论意义，而且具有重要的临床应用价值，为无数正受烧伤、刀伤、各种溃烂煎熬及因患有皮肤癌及顽固性皮肤病而感到绝望的病人带来新为生活的希望。寻找可替代角膜缘干细胞的理想种子细胞构建组织工程化上皮，是治疗因疾病及各种理化因素导致双眼角膜缘干细胞缺损（limbal stem cell deficiency，LSCD）而致盲的病人的首要选择。表皮和角膜均来自外胚层，表皮干细胞（epidermal stem cells，ESCs）和角膜缘干细胞（limbal stem cells，LSCs）有相似的生物学特性。虽在胚胎发育过程中二者方向不同，但并不是不可逆的。本研究在总结、比较ESCs和LSCs生物学特性的基础上，借鉴成体干细胞可塑性的最新研究成果，提出以ESCs替代LSCs重建LSC... 

【文章页数】：119 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
前 言
文献综述
    第一章 表皮干细胞
        1 表皮发育与表皮干细胞在体分布模式
            1.1 表皮发生与角蛋白表达
            1.2 表皮增殖单位(Epidermal Proliferation unit. EPU)学说
            1.3 网状嵴分布模式
            1.4 隆突激活假说
        2 干细胞微环境与干细胞命运调控
        3 表皮干细胞的生物学特性
            3.1 慢周期性(slow cycling)
            3.2 自我更新能力
            3.3 粘附特性
            3.4 表皮干细胞的形态结构特征
            3.5 表皮干细胞表面标志
        4 表皮干细胞分离纯化鉴定
            4.1 分离方法
            4.2 筛选纯化表皮干细胞的方法
            4.3 表皮干细胞的鉴定
        5 表皮干细胞研究中仍需研究的几个问题
            5.1 皮肤中是否存在一种根本干细胞(ulitmate stem cell)？
            5.2 表皮干细胞的标记有待进一步研究
            5.3 分离表皮干细胞的有效方法
            5.4 表皮干细胞的数量
    第二章 表皮干细胞可塑性
        1 成体干细胞可塑性研究
            1.1 成体干细胞可塑性相关概念的演绎
            1.2 成体干细胞可塑性研究概况
            1.3 成体干细胞可塑性研究的特点
            1.4 评价成体干细胞可塑性的标准
            1.5 成体干细胞可塑性现象所引发的几个问题
            1.6 结语
        2 表皮干细胞分化潜能与可塑性
        3 表皮干细胞的应用前景
            3.1 表皮干细胞组织工程皮肤构建中的应用
            3.2 表皮干细胞是理想的基因治疗载体
            3.3 细胞治疗
            3.4 生产转基因动物，推动生物制药产业
    第三章 表皮干细胞重建角膜缘干细胞缺损眼表的可行性研究
        1 角膜缘干细胞基本特性
            1.1 只有角膜缘存在干细胞
            1.2 角膜缘干细胞的慢周期性
            1.3 角膜缘干细胞分化潜能
            1.4 角膜干细胞的分子标记
        2 角膜缘干细胞缺损与治疗
            2.1 角膜缘干细胞缺损(Limbal stem Cell deficiency，LSCD)
            2.2 角膜干细胞缺损治疗措施
            2.3 角膜干细胞移植值得关注的几个问题
        3 表皮干细胞重建角膜缘干细胞缺损眼表的可行性
            3.1 表皮干细胞与角膜缘干细胞有相同的胚胎学起源
            3.2 成体干细胞可塑性现象给予我们新的启示
            3.3 成体干细胞与胚胎干细胞是统一的
实验研究
    第四章 表皮干细胞建系研究
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 ESCs的生长行为
            2.2 组织块法获取ESCS的效率
            2.3 原代培养细胞集落增殖速度与季节的关系
            2.4 ESC3集落形成率
            2.5 不同代干细胞生长曲线
            2.6 原代干细胞与传代后表皮干细胞分子标志
            2.7 表皮干细胞形成表皮膜片
            2.8 由表皮干细胞构建组织工程化皮肤
        3 讨论
            3.1 分离纯化表皮干细胞的方法
            3.2 无血清无饲养层培养体系扩增表皮干细胞
            3.3 表皮干细胞的鉴定
            3.4 成年动物皮肤中的胚胎样干细胞
            3.5 表皮干细胞可分化形成毛囊
        4 小结
    第五章 表皮干细胞诱导分化研究
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 表皮干细胞向神经细胞诱导分化
            2.2 向心肌细胞诱导分化
            2.3 向成骨细胞诱导分化
        3 讨论
            3.1 向神经细胞诱导分化
            3.2 向心肌细胞诱导分化
            3.3 向成骨细胞诱导分化
        4 小结
    第六章 表皮干细胞构建组织工程化角膜上皮重建LSCD模型羊眼表研究
        1 材料和方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 结果
            2.1 羊膜支架
            2.2 LSCD模型羊眼表特征
            2.3 表皮干细胞在羊膜上的生长行为及羊膜植片的组织学特征
            2.4 移植效果
        3 讨论
            3.1 羊膜是负载表皮干细胞的理想载体
            3.2 表皮干细胞羊膜植片能有效重建LSCD模型羊眼表
            3.3 异体移植
            3.4 表皮干细胞重建LSCD眼表的可能性机理
        4 小结
结 论
致 谢
参考文献
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]一种表皮干细胞检测方法的建立[J]. 程大胜 ,夏照帆,唐洪泰,田建广,王皓.  解放军医学杂志. 2003(06)
[2]成年山羊皮肤干细胞体外克隆与诱导分化[J]. 杨学义,曹斌云,冯秀亮,马勇江,窦忠英.  中国修复重建外科杂志. 2003(02)
[3]胎鼠表皮干细胞的分离培养及毛囊再生[J]. 韩军涛,陈璧.  第四军医大学学报. 2003(01)
[4]人羊膜负载猪角朊细胞重建表皮的形态学研究[J]. 闫国和,粟永萍,艾国平,林远,程天民,可金星,黄文琪.  第三军医大学学报. 2002(08)
[5]汗腺发生过程中基质金属蛋白酶与层黏连蛋白、纤连蛋白的表达特征[J]. 李建福,付小兵,盛志勇.  中华创伤杂志. 2002(07)
[6]进一步重视从发育和比较生物学来研究创伤后的组织修复与再生[J]. 付小兵 ,盛志勇 ,王正国.  解放军医学杂志. 2002(05)
[7]人全层组织工程皮肤的研制[J]. 金岩,吕红兵,刘源,赵宇,聂鑫,刘晓亮,张勇杰.  实用口腔医学杂志. 2002(02)
[8]深入开展组织由解剖修复到功能性修复的应用基础研究[J]. 盛志勇,付小兵.  中华外科杂志. 2002(01)
[9]皮肤组织工程研究进展[J]. 蔡霞,曹谊林,商庆新,关文祥.  中华实验外科杂志. 2001(03)
[10]体内外诱导CD34+细胞生成血管内皮细胞的方法及其组织工程学运用[J]. 谭强,沙慧芳,江晓丰,史振余,顾伟勇,周允中.  复旦学报(医学科学版). 2001(03)

博士论文
[1]小鼠胚胎干细胞定向诱导分化成骨细胞研究[D]. 宋晓平.西北农林科技大学 2003



本文编号：3729984