成年豚鼠新皮质浅层神经球培养

发布时间：2017-05-17 12:20

  本文关键词：成年豚鼠新皮质浅层神经球培养，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的分析成年豚鼠新皮质浅层细胞体外增殖和分化潜能,探讨新皮质浅层存在成年神经发生的可能性。 方法分离不同年龄段豚鼠不同部位脑组织,包括新皮质浅层、深层以及海马脑组织,体外悬浮培养、扩增及传代,比较不同年龄、不同部位组织来源的神经球样细胞簇形成率的差异；用Nestin免疫荧光染色进一步检测成年豚鼠皮质浅层分离出的细胞是否具有神经干/祖细胞的特性；去除生长因子后,用胎牛血清和NGF诱导成年豚鼠新皮质浅层神经干/祖细胞进行分化,通过免疫荧光染色检测神经元标记物MAP-2、β-Ⅲ Tubulin和星形胶质细胞标记物GFAP的表达；并应用膜片钳技术对诱导分化后神经元的电生理功能进行检测。 结果所取的豚鼠脑组织细胞在体外可以形成集落样生长的神经球,几乎整个神经球均由Nestin阳性细胞组成,部分神经球细胞共表达GFAP。诱导分化后的细胞显示不同比例的神经元标记物MAP-2、β-Ⅲ Tubulin和星形胶质细胞标记物GFAP染色阳性。膜片钳检测可见诱导分化后的神经元具有典型的Na+-K+电流及持续的动作电位。随着年龄增长,海马区克隆形成率逐渐降低,皮质区克隆形成率并没有明显的年龄相关性。 结论原代培养形成的神经球样细胞簇具有良好的细胞状态和增殖能力。豚鼠海马区细胞的克隆形成能力有随着其年龄增长呈现递减趋势,而皮质区克隆形成率却没有明显的年龄相关性。成年豚鼠新皮质浅层细胞能够体外增殖,并且能够分化为星形胶质细胞和具有生理功能的神经元,该区可能为潜在的神经发生区。图9幅,表0个,参考文献49篇。
【关键词】：神经干/祖细胞 神经球 细胞培养 细胞分化 皮质
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 目录7-9
• 符号说明9-10
• 1 前言10-11
• 2 材料与方法11-17
• 2.1 实验动物11
• 2.2 主要试剂及设备11-12
• 2.3 主要试剂配制12-13
• 2.4 实验方法13-17
• 2.4.1 原代神经干/祖细胞取材及接种13
• 2.4.2 神经干/祖细胞克隆培养13
• 2.4.3 计算克隆培养体系下不同年龄段不同部位的克隆形成率13-14
• 2.4.4 神经干/祖细胞传代培养14
• 2.4.5 神经干/祖细胞特异性标志物Nestin的免疫荧光细胞化学鉴定14-15
• 2.4.6 贴壁神经球的GFAP和Nestin免疫荧光双标鉴定15
• 2.4.7 神经干/祖细胞诱导分化及免疫荧光鉴定15-16
• 2.4.8 膜片钳检测细胞电生理特性16
• 2.4.9 神经干/祖细胞冻存和复苏16-17
• 3 结果17-19
• 3.1 神经干/祖细胞原代分离培养结果及鉴定17
• 3.2 神经干/祖细胞传代培养结果17
• 3.3 神经干/祖细胞诱导分化培养结果及免疫荧光鉴定17-18
• 3.4 神经干/祖细胞诱导分化所得神经元电生理功能检测18
• 3.5 不同年龄段不同部位神经干/祖细胞克隆增殖潜能比较18-19
• 4 讨论19-25
• 4.1 成年哺乳动物神经干细胞与神经发生19-20
• 4.2 大、中型成年哺乳动物神经球培养的建立与优化20-22
• 4.2.1 脑组织分离消化20-21
• 4.2.2 细胞种板与传代21
• 4.2.3 培养基成分选择21-22
• 4.2.4 细胞冻存复苏22
• 4.3 成年豚鼠皮质浅层来源神经球的鉴定22-25
• 5 结论25-26
• 图片说明26-33
• 参考文献33-38
• 综述38-50
• 参考文献45-50
• 攻读学位期间的成果50-51
• 致谢51

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 ;Is the neocortex a novel reservoir for adult mammalian neurogenesis?[J];Neural Regeneration Research;2011年17期

2 章显宝;汪瑛;王震;孔红兵;汪节;江六顺;郭晓利;肖伟;;项丛刺针法对缺血性脑卒中后遗症大鼠BDNF、NGF以及神经行为学的影响[J];上海针灸杂志;2014年02期

3 Chunling Fan;Mengqi Zhang;Lei Shang;Ngobe Akume Cynthia;Zhi Li;Zhenyu Yang;Dan Chen;Jufang Huang;Kun Xiong;;Short-term environmental enrichment exposure induces proliferation and maturation of doublecortin-positive cells in the prefrontal cortex[J];Neural Regeneration Research;2014年03期

4 樊明超;王巧玲;刘克;张欣;关云谦;孙鹏;;人胚胎纹状体来源神经干细胞的体外培养(英文)[J];中国组织工程研究;2013年27期

5 祁存芳;张军峰;陈新林;焦倩;张建水;刘勇;;缺氧对成年大鼠SVZ组织分离培养神经干细胞的影响[J];西安交通大学学报(医学版);2013年06期

中国博士学位论文全文数据库 前5条

1 邱文;SublyticC5b-9诱导GMCs增殖和ECM分泌的机制研究[D];南京医科大学;2009年

2 许智祥;糖原合酶激酶3β在嗅觉系统中功能的研究[D];中国科学院研究生院（武汉物理与数学研究所）;2013年

3 邱e，

本文编号：373413