高滴度慢病毒载体对T细胞亚群感染能力的分析

发布时间：2023-03-07 17:37

　　目的制备高滴度慢病毒载体并探讨不同感染方式T细胞及其亚群的感染能力。方法使用有限稀释的慢病毒感染HT1080细胞,流式细胞术检测细胞感染率,建立慢病毒滴度检测方法。比较不同转染试剂(磷酸钙、PEI、PEI-pro、Xfect纳米颗粒)瞬时转染293T细胞制备的慢病毒载体滴度。使用制备的高滴度慢病毒直接感染T细胞或使用Polybrene和Retronectin促进慢病毒感染T细胞,流式细胞术检测T细胞及其亚群的感染率。结果建立了流式细胞术检测慢病毒滴度的方法。4种转染方法中使用Xfect纳米颗粒制备的慢病毒滴度最高。慢病毒直接感染和加入Polybrene促进感染T细胞感染率均可达50%以上,未观察到Polybrene明显促进T细胞感染作用。高滴度慢病毒对各分化阶段T细胞亚群的感染率均在50%以上。结论成功制备高滴度慢病毒载体,且对T细胞各亚群感染能力无明显差异。本研究为慢病毒感染定向分化T细胞亚群的细胞回输治疗提供了研究基础。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 样本来源
    1.2 试剂
    1.3 仪器
    1.4 不同转染试剂制备慢病毒
        1.4.1 磷酸钙（CaPO4）沉淀法
        1.4.2 PEI转染
        1.4.3 PEI-pro转染
        1.4.4 Xfect纳米颗粒转染
    1.5 慢病毒滴度滴定方法
    1.6 外周血单个核细胞的分离与T细胞活化
    1.7 T细胞感染方法
        1.7.1 慢病毒直接感染（Only Lentivirus)
        1.7.2 使用Polybrene促进感染
        1.7.3 使用Retronectin促进感染
    1.8 流式分析检测T细胞及其亚群的感染率
    1.9 统计学分析
2 结果
    2.1 慢病毒滴度检测方法的建立
    2.2 高滴度慢病毒载体的制备
    2.3 不同感染方式T细胞及其亚群感染能力的比较
3 讨论



本文编号：3757596