VIP对PI3K/Akt信号通路的影响在DC细胞胃癌抗原提呈中的作用研究

发布时间：2023-04-22 17:45

　　研究背景： 胃癌是消化道最常见的恶性肿瘤，严重危害着人类健康。体细胞发生癌变后，机体主要依靠获得性免疫监视功能对其进行免疫清除，在这一免疫功能中抗原提呈细胞起着关键性的作用。树突状细胞是目前发现的抗原提呈功能最强的抗原提呈细胞。另一方面，癌细胞还可分泌免疫抑制因子如胃肠激素血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)等导致机体免疫障碍，最终得以保存自身。有研究提示VIP经过PI3K/Akt信号通路参与机体多种功能的调节，且PI3K/Akt信号通路在树突状细胞（dendritic cells, DCs）分化、生存、分泌细胞因子等方面均有重要作用。因此推测，VIP可能通过影响DCs中PI3K/Akt信号通路参与调控了胃癌的抗原提呈过程。 目的： 探讨VIP对PI3K/Akt信号通路的影响在DCs胃癌抗原提呈中的作用。 方法： 通过药物干预及MKN45共孵育实验，使用两种方法（RT-PCR及免疫细胞化学）检测VIP、LY294002（2-（4-吗啉基）-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮）干预及MKN45共孵育对脐带血来源DCs中PI3K/Akt信号通...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 标本采集
        2.1.3 仪器设备
    2.2 实验主要试剂和溶液配制
        2.2.1 MKN45 培养主要试剂
        2.2.2 DCs 分离、纯化、培养、鉴定主要试剂
        2.2.3 药物干预实验所需要的主要试剂
        2.2.4 RT-PCR 所需要的主要试剂
        2.2.5 免疫细胞化学染色所需要的主要试剂
        2.2.6 实验主要试剂配制方法
    2.3 实验方法
        2.3.1 胃癌细胞株 MKN45 培养
        2.3.2 实验流程图及分组
        2.3.3 DCs 的分离、纯化、培养及鉴定
        2.3.4 药物干预及 MKN45 共孵育试验
        2.3.5 目的基因 mRNA 表达的检测（RT-PCR 方法）
        2.3.6 检测目的基因的蛋白表达（免疫细胞化学方法）
    2.4 图像处理及分析方法
    2.5 统计学处理
    2.6 伦理学问题
第3章 结果
    3.1 LPS 诱导 DCS 成熟实验结果
        3.1.1 DCs 的形态学观察结果
        3.1.2 LPS 诱导 DCs 成熟相关分子表达检测结果
    3.2 药物干预及 MKN45 共孵育后 DCs 中目的基因 mRNA 及蛋白的表达
        3.2.1 VIP、LY294002 干预及 MKN45 共孵育后 DCs 中β-actin mRNA 表达
        3.2.2 VIP、LY294002 干预及 MKN45 共孵育后 DCs 中 CD80 mRNA 及蛋白的表达
        3.2.3 VIP、LY294002 干预及 MKN45 共孵育后 DCs 中 CD86 mRNA 及蛋白的表达
        3.2.4 VIP、LY294002 干预及 MKN45 共孵育后 DCs 中 CD40 mRNA 及蛋白的表达
        3.2.5 VIP、LY294002 干预及 MKN45 共孵育后 DCs 中 MHC-ⅡmRNA 及蛋白的表达
        3.2.6 VIP、LY294002 干预及 MKN45 共孵育后 DCs 中 PI3K p85 mRNA 及蛋白表达
        3.2.7 VIP、LY294002 干预及 MKN45 共孵育后 DCs 中 Akt mRNA 及蛋白的表达
        3.2.8 VIP、LY294002 干预及 MKN45 共孵育后 DCs 中 p-Akt(Ser473)蛋白的表达
第4章 讨论
    4.1 DCS 成熟过程中细胞内抗原提呈相关分子表达变化
    4.2 VIP 干预及 MKN45 共孵育后 DCS 中抗原提呈相关分子变化
    4.3 VIP、LY294002 干预及 MKN45 共孵育后 DCS 中 PI3K/AKT 信号通路变化
    4.4 LY294002 干预 DCS 后抗原提呈相关分子变化
第5章 结论
致谢
参考文献
综述
    参考文献



本文编号：3798120