PTEN调控大鼠原始卵泡启动和生长

发布时间：2023-05-09 19:41

　　目的探讨PTEN对大鼠原始卵泡激活和生长的调控作用和机制。方法 2日龄大鼠卵巢在Waymouth培养系统中培养0、4和8 d,用HE染色检测慢病毒PTEN siRNA的沉默效率及其对原始卵泡生长启动情况。同步用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学染色检测PTEN mRNA和蛋白在卵泡生长中的表达和动态变化;用慢病毒PTEN-shRNA沉默卵巢中PTEN表达后,观察对原始卵泡启动生长及雌二醇和孕酮分泌的影响;此外,利用PI3K抑制剂LY294002探讨了PTEN在原始卵泡形成过程中的可能信号通路。结果 PTEN mRNA和蛋白在原始卵泡中均有表达,随着原始卵泡的发育,其表达水平降低(P<0.01);经PTEN-shRNA慢病毒转染后,荧光成像显示慢病毒在体外已成功转染到卵巢组织,HE染色显示原始卵泡数量减少(P<0.01),表明PTEN参与了原始卵泡的起始。结论 PTEN可通过PI3K信号通路和调节雌、孕激素分泌调控原始卵泡发育。它在原始卵泡的发育启动中起着重要的作用。

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物:
        1.1.2 主要试剂:
    1.2 方法
        1.2.1 卵巢采集和体外培养:
        1.2.2 慢病毒转染卵巢组织:
        1.2.3 原始卵泡的形态学观察和PTEN蛋白分析:
        1.2.4 RT-PCR检测PTEN mRNA在原始卵泡中的表达:
        1.2.5 慢病毒转染后原始卵泡的发育:
        1.2.6 卵巢Waymouth培养液激素水平:
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 原始卵泡中PTEN蛋白的定位及表达的时效性变化
    2.2 PTEN-shRNA慢病毒转染PTEN在原始卵泡中的表达变化
    2.3 PTEN-shRNA慢病毒转染后的原始卵泡的发育
    2.4 检测卵巢Waymouth培养液激素水平
    2.5 PI3K抑制剂培养后原始卵泡发育及PTEN mRNA和蛋白表达变化
    2.6 PTEN shRNA慢病毒转染后原始卵泡中PI3K蛋白表达变化
3 讨论



本文编号：3812272