抗KG1a细胞表面分子基因工程抗体及其抗原分子的研究

发布时间：2023-05-09 22:35

　　造血是一个受高度调控、具有复杂细胞社会性行为的生理过程，造血干／祖细胞在这一过程中处于中心地位。造血干／祖细胞表面具有多种分化阶段特异性标志分子、细胞因子受体分子及粘附分子等多种细胞表面分子，在造血细胞的增殖、分化、迁移和归巢等过程中发挥重要作用。分离这些细胞表面分子及其抗体，研究它们的结构与功能作用是实验血液学的重要研究课题，对于深入理解血细胞发生、发展的生理及病理过程，发展血液系统恶性肿瘤的新型诊疗方法和生物制剂具有重要的理论价值和实际意义。本论文的目的在于寻找新的有功能的抗造血干／祖细胞表面分子的抗体，探索其功能特性，并通过所获得的抗体分离抗原分子及其基因。 首先，构建KGla细胞免疫小鼠的噬菌体展示单链抗体(scFv)文库。用具有造血干／祖细胞特征的人髓系自血病细胞系KGla细胞免疫小鼠，取其脾细胞，提取RNA，利用设计合成的用于扩增全套抗体重链可变区和轻链可变区的寡核苷酸引物，经RT-PCR扩增VH和VΚ基因，将其先后克隆入噬菌粒展示表达载体pSEX81，电穿孔转化大肠杆菌XL1-Blue，构建scFv文库；测定了文库的库容量和BstNI酶切单个克隆分析文库的多样性，...

【文章页数】：113 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
缩略词表
前言
实验材料
第一部分 抗KGla细胞噬菌体展示抗体文库的构建和鉴定
    实验方法
    实验结果
第二部分 特异性单链抗体的分离、鉴定和结构分析
    实验方法
    实验结果
第三部分 可溶性单链抗体的表达、纯化和功能分析
    实验方法
    实验结果
第四部分 KGla细胞cDNA文库的构建和表达筛选
    实验方法
    实验结果
讨论
小结与结论
参考文献
综述
    1 噬菌体展示技术的发展与应用
    2 选择感染性噬菌体(SIP)技术：一种新的相互作用分子筛选技术
志谢
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本文编号：3812509