类固醇激素受体起始密码子区突变位点报告基因系统的构建

发布时间：2023-06-03 09:55

　　目的构建含有类固醇激素受体(VDR)起始密码子区突变序列的双荧光素酶报告基因系统。方法以人肝组织总RNA为模板应用RT-PCR方法扩增出VDR cDNA基因序列全长并克隆于T载体后酶切再与空载体pcDNA3.1(-)B-myc/his连接形成重组载体;测序验证后与荧光素酶报告基因连接构建起始密码子区T/C突变型人VDR,以phRL-SV40质粒作为内对照共转染COS-7细胞,设1,25(OH)2VD3不同浓度点进行干预后,化学发光法检测荧光强度。结果人VDR基因起始密码子区突变重组质粒测序验证与Genbank完全相同。通过双荧光素酶报告基因分析系统检测,1,25(OH)2VD3干预组荧光素酶活性数值显著升高,差异有统计学意义(P<0.05),表明人VDR起始密码子区突变重组体在COS-7细胞中存在转录激活能力。结论成功构建了含有起始密码子区突变的报告基因载体,为VDR有关的药物代谢异常、肿瘤易感性提供机制性指导。

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 人VDR基因克隆
        1.2.2 野生型和起始密码子区突变VDR真核表达载体的构建
        1.2.3 转染处理
        1.2.4 双荧光素酶活性分析
    1.3 统计处理
2 结 果
    2.1 真核表达载体人核受体野生型VDR的构建
    2.2 真核表达载体人核受体VDR突变型的构建
    2.3 荧光素酶报告基因载体的构建
3 讨 论



本文编号：3829116