甘丙肽过表达转基因小鼠的建立及其生物学特性研究

发布时间：2017-05-21 22:09

  本文关键词：甘丙肽过表达转基因小鼠的建立及其生物学特性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的: 构建甘丙肽（galanin,GAL）过表达转基因小鼠模型； 初探甘丙肽过表达转基因小鼠的生物学性状。 方法: 重组质粒PUC18-PDGF β-GAL用XbaⅠ、HindⅢ进行双酶切，将连接有启动子PDGFβ的甘丙肽基因片段回收纯化后，用显微注射的方法将甘丙肽基因片段注入受精卵的雄原核中，选取发育良好的受精卵移植到假孕母鼠的输卵管壶腹部，待其产仔；PCR鉴定GAL转基因小鼠的基因表型，Western blotting和实时定量RT-PCR检测GAL蛋白的表达水平。 将PCR检测阳性的F0代小鼠与野生型小鼠交配以传代，即可获得Fl代小鼠，同样用PCR方法筛选出F1代阳性鼠；再用F1代阳性与阳性鼠交配，获得F2代，以此类推，直到获得GAL过表达转基因纯合子小鼠。 在小鼠出生后3周，5周，7周，9周分别测量所有小鼠的体重，体长和腹围。 眼眶采血处死小鼠，留取血清、脑组织和肝组织标本；ELISA法检测小鼠血清中GAL，胰岛素水平，用临床诊断试剂盒测定肝组织甘油三脂和总胆固醇含量。 对肝组织用甲醛固定，，切片，进行HE染色，在光镜下观察其病理变化。 结果: 通过原核显微注射的方法将2968kb的转基因片段PDGF β-GAL转入小鼠受精卵，获得子代小鼠50只，经PCR检测，有8只小鼠在基因组上整合有GAL基因(编号分别为5，28，37，43，44，45和46)，整合率为16％。 转入的基因片段PDGF β-GAL在脑组织中的表达水平比肝组织高。 GAL过表达转基因鼠肝组织甘油三酯和总胆固醇含量均明显高于野生型小鼠（P0.01）；而血清胰岛素水平比野生型小鼠低(P0.01)。 HE染色显示GAL过表达转基因鼠的肝细胞发生了不同程度的脂肪变性。 结论: 通过显微注射法使外源基因PDGFβ-GAL在小鼠基因组中整合，成功建立了GAL过表达转基因小鼠，为进一步研究GAL在神经系统的生物学功能奠定了重要基础。
【关键词】：甘丙肽 过表达 小鼠 转基因
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R-332;Q78
【目录】：

• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 插图、附表清单10-11
• 主要符号中英文对照表11-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-29
• 1.材料14-19
• 1.2 菌液和质粒14
• 1.3 主要试剂14-15
• 1.4 主要仪器15-16
• 1.5 主要试剂配制16-19
• 2.实验方法19-29
• 2.1 目的片段 PDGF-GAL 的制备19-20
• 2.2 GAL 转基因鼠的制备20-22
• 2.3 GAL 转基因小鼠的鉴定22-28
• 2.4 转基因小鼠的繁殖28
• 2.5 血糖和胰岛素水平的测定28
• 2.6 肝组织甘油三酯和总胆固醇的测定28-29
• 2.7 统计分析29
• 结果29-37
• 1. 质粒 PUC18-PDGFβ-Gal 的双酶切鉴定29
• 2. 转基因首建鼠的获得29-30
• 3. 转基因首建鼠的 PCR 鉴定30
• 4.转基因小鼠 GAL 蛋白表达水平的鉴定30-31
• 5.转基因小鼠中 GAL mRNA 相对含量测定31-33
• 6.转基因小鼠的繁殖33-34
• 7.转基因小鼠的生长情况34-35
• 8.血糖值和血清胰岛素水平35
• 9.肝组织甘油三酯和总胆固醇含量35-36
• 10.肝组织的病理切片36-37
• 讨论37-40
• 结论40
• 参考文献40-44
• 综述44-50
• 参考文献47-50
• 个人简历50-51
• 致谢51

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