剪切应力对种植于不同细胞外基质的内皮祖细胞的生物学特性的影响

发布时间：2017-05-22 10:03

  本文关键词：剪切应力对种植于不同细胞外基质的内皮祖细胞的生物学特性的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:本文旨在探讨不同细胞外基质对大鼠骨髓来源的晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物学特性的影响及种植于不同细胞外基质的晚期EPCs对流体剪切应力的反应性。方法:1.密度梯度离心法分离大鼠骨髓单个核细胞,应用M199完全培养基(含15%胎牛血清,10μg/L VEGF及5μg/L b FGF)进行诱导培养。细胞接种前,培养板分别用纤维粘连蛋白(Fibronectin,Fn)、层粘连蛋白(Laminin,Ln)或鼠尾胶原(Collagen,Col)包被,分组为Fn组、Ln组及Col组。以传至第三代的EPCs,即晚期EPCs为靶细胞,采用CCK-8法、划痕实验、粘附能力测定实验及Matrigel基质胶分别检测其增殖、迁移、粘附及管状结构形成等功能指标;荧光定量RT-PCR检测内皮分化标志基因v WF和CD31的表达。2.利用平板流室系统对种植于不同细胞外基质的晚期EPCs施以12 dyne/cm2剪切应力,免疫荧光染色观测F-actin的排列情况;CCK-8法检测细胞增殖;Boyden小室迁移实验检测细胞迁移;粘附能力测定实验检测细胞粘附;荧光定量RT-PCR及流式细胞仪检测细胞分化;Matrigel胶实验检测管状结构形成。结果:1.静止状态下,Fn组和Col组细胞增殖能力强于Ln组(P0.05);Fn组细胞粘附能力强于Col组和Ln组(P0.01);Fn组和Col组细胞迁移能力强于Ln组(P0.01);Fn组管腔样结构形成能力强于Col组及Ln组(P0.05);三组v WF和CD31基因表达无明显差异。2.剪切应力处理后,Ln组细胞增殖、迁移及血管能力能力均强于Fn组和Col组(P0.05)。静止状态的EPCs,F-actin主要分布在细胞的周边和细胞核周,排列没有明显的方向性。剪切应力加载后,Fn组细胞骨架按照切应力流动的方向排列,肌丝较之静止状态时杂且乱,而Col组和Ln组在剪切应力处理完后,F-actin肌丝明显增粗,且应力纤维沿剪切应力方向排列整齐,Ln组F-actin聚集成束,应力纤维较多。结论:EPCs的生物学特性受细胞外基质的影响;种植于不同细胞外基质的EPCs对剪切应力的反应性不同。
【关键词】：细胞外基质 内皮祖细胞 纤维粘连蛋白 层粘连蛋白 鼠尾胶原 剪切应力
【学位授予单位】：潍坊医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 符号说明8-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-22
• 结果22-25
• 讨论25-30
• 结论30-31
• 附图表31-40
• 参考文献40-46
• 文献综述46-63
• 参考文献55-63
• 致谢63-64
• 攻读学位期间撰写的论文64
• 附件64

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本文编号：385341