双环己酮草酰二腙诱导的脱髓鞘模型的特点及大麻素WIN55，212-2对其髓鞘修复作用的研究

发布时间：2017-05-22 12:07

  本文关键词：双环己酮草酰二腙诱导的脱髓鞘模型的特点及大麻素WIN55，212-2对其髓鞘修复作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景： 多发性硬化(MS)是一种多发于年轻人的慢性炎性脱髓鞘疾病，严重影响人们的生命健康。目前,该疾病还没有完整的治疗措施，因此人们对该疾病的治疗研究付出了巨大地努力，例如通过调节免疫系统或者抗炎治疗，或者通过降低少突胶质细胞的死亡数量来保护轴突，防止轴突损伤等。目前的研究发现大麻素对MS的疾病有很好的治疗效果，应用非选择性大麻素受体激动剂比单独应用选择性CB1或CB2受体激动剂对实验性自免性脑脊髓炎(EAE)模型能发挥更好的治疗效果；大麻素WIN55,212-2为一种人工合成的大麻素，近期的研究发现其能够很好的缓解EAE模型的症状，治疗效果主要是通过其发挥调节免疫应答和抗炎作用来实现的，进而能够促进少突胶质细胞以及少突胶质细胞前体细胞的存活，增加olig-2的表达。但大麻素在非免疫调节途径下对MS的治疗效果却是未知，因此我们通过利用受免疫调节影响较小的Cuprizone(CPZ)诱导的脱髓鞘模型来观察大麻素WIN55,212-2在非免疫环境下对MS的治疗效果，为大麻素对脱髓鞘疾病的治疗机制提供新的补充 目的： 本实验通过体重和行为学检测对CPZ模型小鼠的整体状态进行分析，然后主要对该模型的髓鞘脱失进行研究，利用LFB、MBP等形态学手段检测CPZ模型小鼠髓鞘的变化以及注射大麻素WIN55,212-2后的治疗效果，，同时通过GFAP免疫组化染色观察星形胶质细胞的变化，以探讨大麻素WIN55,212-2对胶质瘢痕的影响。 方法： 取6周龄C57BL/6雄性小鼠，体重在15-16g之间，按不同实验目的分为模型实验研究部分和药物注射实验研究部分。①模型实验研究部分：分为正常组、CPZ模型组，正常组3只，CPZ模型组15只，共18只。正常组每天喂养普通饲料，CPZ模型组每天喂养含有0.25％CPZ的混合饲料；CPZ模型鼠从喂养鼠粮开始每隔一天进行体重和行为学(旋转棒，旷场试验)检测，从第1周末开始，每周3只灌注取材，连续5周，第5周末结束(CPZ1周组, CPZ2周组，CPZ3周组，CPZ4周组，CPZ5周组)，利用LFB染色观察胼胝体区域髓鞘变化，利用GFAP免疫组化染色观察星形胶质细胞。②药物注射实验研究部分：分为正常组、第2周WIN55,212-2给药组与DMSO对照组、第4周WIN55,212-2给药组及相应DMSO对照组，每组10只，共50只。正常组每天喂养普通饲料，给药组每天喂养含有0.25％CPZ的混合饲料，在第2周初和第4周初进行WIN55,212-2注射，DMSO(二甲基亚砜，WIN55,212-2溶剂)对照组则在相同条件下注射10％DMSO：生理盐水1:1的混合液，继续喂养CPZ混合饲料，于第3、5周末通过体质量变化观察整体状态；旋转棒实验观察小鼠运动功能，利用LFB和MBP染色观察胼胝体区域髓鞘变化，利用GFAP免疫组化染色观察星形胶质细胞。 结果： 1. CPZ模型小鼠与正常小鼠的比较 与正常组相比，随着时间延长，在实验结束时：①同期CPZ模型小鼠体重明显下降(P0.05)；②旋转棒实验和旷场实验发现运动功能逐渐减退，实验结束时部分小鼠几乎不能维持在旋转棒上(P0.05)，旷场试验中CPZ模型小鼠爬行总路程下降，但通过旷场实验中央路程比发现CPZ模型小鼠的探索习性并没有受到影响(P0.05)；③LFB染色发现模型小鼠的髓鞘逐渐脱失，实验结束时髓鞘几乎完全脱失(P0.05)；④GFAP组化染色发现星形胶质细胞数量逐渐增多(P0.05)。 2.大麻素WIN55,212-2对CPZ模型的治疗作用 与同期DMSO对照组比较发现,注射大麻素WIN55,212-2组后：⑴CPZ模型小鼠体重下降趋势明显弱于DMSO对照组(P0.05)；⑵转棒实验发现给药组运动功能弱于正常组，与DMSO对照组相比明显改善(P0.01)；⑶LFB染色发现给药组髓鞘脱失减缓(P0.01)，MBP免疫组化染色也验证了此结果(P0.01)；⑷注射WIN55,212-2组GFAP细胞阳性表达数量明显少于对照组。 结论： 1、WIN55,212-2能够改善CPZ脱髓鞘模型小鼠的体重和运动功能等整体状态。 2、CPZ模型小鼠在5周末髓鞘完全脱失，能很好地模拟MS髓鞘脱失的病理变化，注射WIN55,212-2能够减缓CPZ模型小鼠髓鞘的脱失，促进髓鞘的修复。 3、CPZ模型小鼠星形胶质细胞数量逐渐增多，这可能加速胶质瘢痕的形成影响髓鞘的修复；WIN55,212-2可能通过减少胶质瘢痕的形成来促进髓鞘的修复。 本次研究主要证明了大麻素WIN55，212-2对受免疫调节较小的CPZ模型的治疗作用，通过行为学证明了大麻素WIN55,212-2能够促进运动功能的恢复，从形态学证明了大麻素WIN55,212-2能够促进髓鞘的修复以及减少星形胶质细胞的形成，这也表明大麻素WIN55,212-2可能是通过减少胶质瘢痕的形成促进髓鞘的修复，为大麻素对MS等脱髓鞘疾病的治疗提供新的思路。
【关键词】：大麻素 多发性硬化 髓鞘 星形胶质细胞 行为学
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R744.51;R-332;R285.5
【目录】：

• 缩略语表4-5
• Abstract5-8
• 摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 急性期 CPZ 脱髓鞘模型的特点13-26
• 2.1 材料与方法13-18
• 2.2 结果18-23
• 2.3 讨论23-24
• 2.4 结论24-26
• 第三章 大麻素 WIN55,212-2 对 CPZ 脱髓鞘模型髓鞘修复作用的研究26-37
• 3.1 材料与方法26
• 3.2 结果26-34
• 3.3 讨论34-36
• 3.4 结论36-37
• 全文总结37-38
• 参考文献38-40
• 文献综述40-49
• 参考文献45-49
• 在读研究生期间发表的文章49-50
• 致谢50

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本文编号：385660