14-3-3/HIP-55复合体增强HIP-55蛋白稳定性

发布时间：2023-12-12 19:00

　　目的:用双分子荧光互补及免疫共沉淀技术验证HIP-55与14-3-3在HEK293细胞中存在相互作用,并进一步研究其生物学意义。方法:利用GATEWAY系统构建PDEST-N-Venus-HIP-55WT(野生型),PDEST-N-VenusHIP-55AA(突变体S269A/T291A),PDEST-GST-HIP-55WT及PDEST-C-Venus-14-3-3τ重组质粒,利用双分子荧光互补及免疫共沉淀技术检测两者的相互作用,同时应用14-3-3蛋白相互作用抑制肽R18和HIP-55蛋白突变体(HIP-55AA突变体S269A/T291A不能与14-3-3相互作用)作为工具研究两者结合后对嘌呤霉素诱导的HIP-55蛋白表达的影响。结果:外源转入的Venus-HIP-55WT、Venus-HIP-55AA及Venus-14-3-3蛋白能够在HEK293细胞中表达;双分子荧光互补实验结果表明HIP-55与14-3-3存在相互作用,HIP-55蛋白的S269/T291位点介导HIP-55与14-3-3的相互作用;免疫共沉淀技术表明内源性HIP-55与14-3-3存在相互作用;进一步研究...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1. 1 双分子荧光互补( bimolecular fluorescence complementation,Bi FC) 分析重组质粒构建
    1. 2 双分子荧光互补( Bi FC) 分析
    1. 3免疫共沉淀( co-immunoprecipitation,co-IP) 检测
    1. 4 免疫印迹
2 结果
    2. 1 双分子荧光互补分析重组蛋白的表达
    2. 2 双分子荧光互补( Bi FC) 分析HIP-55 与14-3-3相互作用( 图2)
    2. 3 免疫共沉淀技术证明HIP-55 与14-3-3 存在相互作用
    2. 414-3-3 与HIP-55 形成蛋白质复合物后增强HIP-55 蛋白的稳定性
3 讨论



本文编号：3873454