沙利度胺对炎症性肠病模型鼠紧密连接蛋白表达的调节

发布时间：2017-05-23 13:15

  本文关键词：沙利度胺对炎症性肠病模型鼠紧密连接蛋白表达的调节，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：[目的]：探讨沙利度胺对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导炎症性肠病模型鼠肠粘膜上皮细胞紧密连接蛋白occludin、claudin-1及zo-1表达的调控,进一步阐明沙利度胺对炎症性肠病模型鼠肠粘膜屏障的保护作用。[方法]：选择4-5周龄SD大鼠分为正常组(24只)、模型组(28只)、沙利度胺治疗组(28只),模型组及治疗组使用TNBS诱导炎症性肠病鼠模型。各组在观察中第7天、10天各组处死8-12只大鼠,留取血液标本及肠道标本。分别进行(1)HE染色、电镜观察,及大体评分、组织学损伤评分；(2)使用ELISA方法测定血TNF-a的水平；(3)使用western blot方法观察occludin、claudin-1蛋白水平变化；(4)使用免疫组化方法观察zo-1的表达水平变化及定位；(5)使用荧光定量PCR的方法观察occludin、claudin-1、zo-1的mRNA水平变化。[结果]：1.一般情况及大体评分造模后大鼠出现便血、稀便、腹胀等消化道症状及活动减少等全身症状,解剖时肠道粘连较严重,肠道大体评分升高。沙利度胺治疗组大鼠较模型组腹泻、腹胀减轻,全身症状好转。解剖肠道时肠道粘连不明显,大体评分降低。2.HE染色、组织学评分及电镜观察TNBS诱导炎症性肠病鼠造模后,模型组较正常组组织学评分增高；沙利度胺治疗(150mg/kg)后较模型组,组织学评分降低,在第10天时两者之间的评分差异具统计学意义(p=0.0273)。电镜观察下第7天及第10天时,模型组紧密连接结构不清晰,长度缩短,桥粒结构减少；沙利度胺治疗组紧密连接较模型组结构清晰,长度增长,桥粒结构丰富。3.血TNF-α因子水平ELISA测定血液中TNF-α因子水平,较之正常组,第7天时模型组TNF-α水平明显升高(p=0.0268)；而经沙利度胺治疗后,ELISA测定治疗组血液中TNF-α水平较正常组仍高(p=0.0304)。ELISA测定血液中第10天时,模型组TNF-α水平明显升高(p=0.0078)；而经沙利度胺治疗后,ELISA测定治疗组血液中TNF-α水平较正常组稍高(p=0.0131)。第10天较第7天,模型组TNF-α水平升高,而沙利度胺治疗组降低,模型组与沙利度胺治疗组两组之间差别尚无统计学意义。4.肠道粘膜组织中occludin、claudin-1、zo-1蛋白水平的调节(1)非磷酸化occludin:治疗第7天,非磷酸化occludin在模型组(p0.001)及沙利度胺组(p=0.023)较其在正常组明显增多且有统计学意义,且模型组较沙利度胺治疗组非磷酸化occludin蛋白显著增多且有统计学意义(p=0.023)。治疗第10天,模型组及沙利度胺组较正常组,非磷酸化occludin蛋白增多但无统计学意义,且两组之间无明显差别。治疗第10天与治疗第7天相比,模型组非磷酸化occludin蛋白明显减少且有统计学意义(p=0.017)。沙利度胺组非磷酸化occludin蛋白水平无明显变化。(2) claudin-1治疗第7天,模型组较正常组claudin-1蛋白减少且有统计学意义(p=0.004),沙利度胺组较正常组减少,但无统计学意义p=0.050)。模型组较沙利度胺组claudin-1蛋白减少但无统计学意义。治疗第10天,模型组较正常组claudin-1蛋白减少且有统计学意义(p=0.006),沙利度胺组较正常组减少但无统计学意义。模型组较沙利度胺组claudin-1蛋白减少且有统计学意义p=0.024)。治疗第10天与治疗第7天相比,模型组claudin-1蛋白量减少但无统计学意义,沙利度胺组claudin-1蛋白增加,但无统计学意义(p=0.204)。(3)zo-1：免疫组化测定第7天,模型组较沙利度胺组(p=0.72)、正常组(p=0.31)增加但无统计学意义,沙利度胺组较正常组增加无统计学意义(p=0.546)。治疗第10天,模型组较沙利度胺组p=0.426)、正常组(p=0.0503)增加但无统计学意义,沙利度胺组较正常组增加但无统计学意义(p=0.212)。zo-1定位在正常组中主要分布在细胞之间顶端细胞膜处,而模型组及沙利度胺组分布在细胞质中,沙利度胺较模型组好转。5.肠道粘膜组织中occludin、claudin-1、zo-1转录水平的调节(1) occludin mRNA水平在第7天时模型组最高,较沙利度胺组(p=0.0006)及正常组(p=0.0074)明显升高；沙利度胺组较正常组降低,但无统计学意义。第10天时,模型组及沙利度胺组趋向于正常。(2) claudin-1 mRNA水平在第7天时模型组最低,较沙利度胺组(p=0.4926)及正常组(p=0.0033)降低；沙利度胺组较正常组明显降低(p=0.0375)。第10天时,模型组(p=0.019)及沙利度胺组(p=0.65)较正常组降低；沙利度胺组较模型组升高(p=0.0171)。(3) zo-1 mRNA水平在第7天时模型组最高,较沙利度胺组(p=0.049)及正常组(p=0.0414)升高；第10天时,模型组(p=0.0016)及沙利度胺组(p=0.0073)较正常组明显增高。沙利度胺组第10天较第7天时zo-1mRNA表达水平增高(p=0.0348)。[结论]:TNBS造模可以引起模型组大鼠血TNF-α水平升高,粘膜及粘膜下严重炎症浸润,上皮细胞排列及紧密连接结构遭到破坏。蛋白方面,非磷酸化occludin水平升高、claudin-1蛋白水平降低、zo-1水平升高、zo-1的分布向细胞质内转移；mRNA方面,occludin、zo-1受炎症因子刺激表达增加,而claudin-1表达降低。沙利度胺治疗后可以显著降低血TNF-a水平,减轻炎症浸润,改善上皮细胞排列和肠道紧密连接,治疗组较之模型组,蛋白方面,occludin的非磷酸化程度减少,同时claudin-1蛋白水平较高、zo-1水平较低,zo-1相对更集中地分布于细胞膜处；mRNA方面,occludin、zo-1表达升高的程度及claudin-1表达降低的程度均有所缓解。
【关键词】：沙利度胺 炎症性肠病 紧密连接蛋白 occludin claudin-1 zo-1
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R-332;R725.7
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-13
• 造模及标本的留取、大体评分13-15
• 一、材料和方法13-14
• 二、结果14-15
• HE染色、组织学评分及电镜观察15-20
• 一、材料和方法15-16
• 二、结果16-20
• ELISA方法测定血TNF-α因子水平20-22
• 一、材料和方法20-21
• 二、结果21-22
• Western blot及免疫组化测定occludin、claiidin-1、ZO-1蛋白的表达及定位22-31
• 一、Western blot材料及方法22-24
• 二、免疫组化材料及方法24-25
• 三、Western blot结果及免疫组化结果25-29
• 四、TNF-α浓度与非磷酸化occludin、claudin-1蛋白水平的关系29-31
• 荧光定量PCR测定occludin、claudin-1、Zo-1蛋白基因转录水平31-36
• 一、材料与方法31-33
• 二、结果33-36
• 讨论36-40
• 参考文献40-44
• 综述44-56
• 参考文献51-56
• 致谢56-57

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本文编号：388056