流感病毒血凝素转位结构域的截短体/突变体的活性在靶向促凋亡分子中的应用

发布时间：2024-02-13 20:12

　　本课题的研究目标是对流感病毒血凝素转位结构域（HA2）进行截短和突变，筛选获得长度最短、转位功能较强的HA2优化短肽，用于靶向促凋亡分子的构建。在本课题组前期的工作中，已将HA2引入到靶向促凋亡分子中，体内外实验证实其具有转位活性，能够促进杀伤效应分子从内吞体转位到胞浆，增强抗肿瘤作用。在此基础上，本研究对HA2进行改构优化，设计获得了6种截短体和3种突变体，通过体外红细胞溶解实验、肿瘤细胞杀伤实验和荧光共振能量转移实验（FRET）比较这些HA2截短体/突变体的转位功能强弱。首先，我们利用体外红细胞溶解实验对HA2改构体进行功能筛选，如果破坏红 细胞膜的能力越强，就会导致上清中血红蛋白含量越高，表明HA2改构体的转位功能越强。以野生型HA2作为对照，将合成的上述9种HA2截短体/突变体与分离的人外周血红细胞相孵育。剂量效应实验和时间效应实验的结果均表明，在相同条件下E5C3的溶血能力强于HA2，E5弱于HA2，并且呈现出时间依赖关系和某种程度的剂量依赖关系。羧基端的3个截短体C3、C15、C8中，仅C3具有溶血能力，提示HA2的2个螺旋区对于溶血功能至关重要，去掉一个或两个均会使HA2...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图2-2pCMV-e23sFv-Fdt-HA2-tBid的酶切鉴定图谱

e23sFvFdttApaⅠNotⅠtBidXhaⅠHindⅢ图2-1重组载体结构示意图MarkerHindⅢ+ApaⅠHindⅢ+NotⅠNotⅠ+XbaⅠXbaⅠ+A

图2-3包含HA2截短体/突变体的重组载体酶切鉴定图谱（均用HindⅢ+ApaⅠ酶切）100

-3包含HA2截短体/突变体的重组载体酶切鉴定图谱（均用HindⅢ+ACMV-e23sFv-Fdt-HA2-tBid;CMV-e23sFv-Fdt....

图2-4包含HA2截短体/突变体的靶向促凋亡分子诱导BT474细胞凋亡裸细胞pCMV-e23sFv-Fdt-E5C3M7-tBidpCMV-e23sFv-Fdt-tBiddpCMV

为：E5C310.38%±0.0042>HA28.6%±0.0031>Null5.01%±0.0044>E5C3M74.98%±0.0055>C....

图2-6包含HA2截短体/突变体的靶向促凋亡分子诱导SKBR3细胞凋亡裸细胞pCMV-e23sFv-Fdt-E5C3M7-tBidpCMV-e23sFv-Fdt-tBiddpCMV

第四军医大学硕士学位论文pCMV-e23sFv-Fdt-HA2-tBidpCMV-e23sFv-Fdt-M7-tBidpCMV-e23sFv-....

本文编号：3897137