超抗原SEA拮抗伊马替尼阻断TCR信号通路机制的研究

发布时间：2017-05-24 09:06

  本文关键词：超抗原SEA拮抗伊马替尼阻断TCR信号通路机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的: 研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）在活化T细胞过程中，对TCR信号通路相关激酶转录与蛋白表达的影响；从分子水平探讨SEA能否拮抗伊马替尼对T细胞的免疫抑制作用。方法: 1.不同浓度SEA刺激T系细胞株（Jurkat和Molt4）后，用qRT-PCR以及Westernblotting分别检测TCR信号通路相关激酶Lck、Fyn、ZAP70的mRNA及蛋白质表达的变化。 2.以Jurkat和正常人外周血T细胞为实验对象，根据是否用SEA（20ng/mL）预处理细胞24h分为两组，继而用伊马替尼（40nmol/L）处理1h，并设置空白对照。实验分为空白对照(control)、SEA单独处理（SEA）、伊马替尼单独处理(IM)、SEA预刺激24h后用伊马替尼处理1h（SEA+IM）四个组。用抗CD3/CD28抗体刺激细胞24h后，ELISA检测IL-2表达水平，CCK-8检测细胞增殖活性；抗CD3/CD28抗体刺激15min，，Western blotting检测Lck、ZAP70、LAT、PLCγ1的磷酸化情况。结果: 1.10ng/ml SEA刺激Jurkat及Molt4细胞24h后，在转录水平上，二者变化相似，上调细胞Lck，下调ZAP70，对Fyn无影响。 2. SEA刺激Jurkat细胞24h后，上调Lck、ZAP70的蛋白表达，且具有剂量依赖性，对Fyn无影响。 3. CD3/CD28联合单抗激活Jurkat及外周血T细胞的TCR信号通路，诱导激酶Lck、ZAP70、LAT、PLCγ磷酸化；伊马替尼抑制CD3/CD28诱导的Lck、ZAP70、LAT、PLCγ激酶的磷酸化，抑制T细胞的增殖与IL-2的分泌，SEA能拮抗伊马替尼的这些抑制效应。结论: SEA可以刺激T细胞上调Lck、ZAP70的mRNA与蛋白表达；SEA通过上调TCR通路激酶Lck、ZAP70、LAT、PLCγⅠ磷酸化水平拮抗伊马替尼对T细胞的免疫抑制效应；Lck的表达量起到调控T细胞活化阈值的作用，上调Lck表达量降低TCR活化阈值，抑制Lck则升高TCR活化阈值。
【关键词】：金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA） 伊马替尼（imatinib） T细胞受体（TCR） 实时定量PCR 蛋白质印迹 Lck激酶 ZAP70
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 一 前言8-19
• 1. CML 的治疗概述8-11
• 2. 伊马替尼抑制免疫应答的机制11-15
• 3. 超抗原简介15-17
• 4. 研究的可行性分析及意义17-19
• 二 材料与方法19-34
• 1. 实验耗材、试剂与设备19-22
• 2. 实验方法22-26
• 3. 第一部分实验步骤26-32
• 4. 第二部分实验步骤32-33
• 5. 实验数据分析33-34
• 三 结果34-45
• 1 第一部分实验结果34-39
• 2 第二部分实验结果39-45
• 四 讨论45-49
• 1. TCR 上游信号通路蛋白分子表达与 T 细胞活性45-46
• 2. IM 对 LCK、FYN、ZAP70 激酶影响46-47
• 3. SEA 对 LCK、FYN、ZAP70 激酶影响47
• 4. SEA 拮抗 IM 免疫抑制 LCK、FYN、ZAP70 激酶的作用47-48
• 5. LCK 是调控 T 细胞活化的重要因素48-49
• 五 展望49
• 结论49-50
• 参考文献50-54
• 英文缩略词54-56
• 附录一 在校期间发表的论文56-57
• 致谢57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 高珂;林晨;白雪;陈少华;杨力建;陈思;B.N.Selvakumar;李扬秋;;SEA对PML-RARα多肽体外诱导外周血单个核细胞TCRζ链表达的作用[J];暨南大学学报(医学版);2008年04期

2 高永鹏;林晨;田红霞;高珂;郜世隽;江振友;陈少华;沈琦;李扬秋;;SEA联合K562细胞体外诱导正常人脐带血单核细胞TCRζ链表达的作用[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);2010年02期

3 高永鹏;林晨;田红霞;陈琛;秦雅楠;周羽z

本文编号：390316