胎肝Sca-1～+细胞的横向分化和应用的实验研究

发布时间：2024-02-21 14:45

　　目的 探讨胎肝Sca-1⁺细胞横向分化的能力、特点和在肾损伤修复中的作用。方法取14.5天C57BL／6j小鼠的胎肝，制成单细胞悬液；用快速PCR方法鉴定细胞的性别；收集雄性细胞，用MACS(magnetic cell sorting)技术分离雄性胎肝Sca-1⁺(Stem Cell Antigen-1)细胞；用同样方法分离骨髓Sca-1⁺细胞；将2×10⁴的雄性胎肝Sca-1⁺细胞移植给受致死量γ照射的同系成年雌性小鼠；2～6月后取受体小鼠的肾、肝、肺、胃和小肠组织，制作3-5μm石蜡切片；用原位杂交技术追踪Y染色体来确定细胞的来源，同时用特异性组织化学技术显示组织特征。为了研究胎肝Sca-1⁺细胞修复能力，用甘油诱导小鼠急性肾功能衰竭(acute renal failure．ARF)的模型；3h后，腹膜下注射10μg／kg的G-CSF连续5天，监测血清肌酐和尿素氮水平以及肾组织病理形态。为了消除内源雌性干细胞的作用，用致死量射线清除小鼠体内造血干细胞，...

【文章页数】：121 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
前言
    研究假说、立体依据、研究方案
    研究背景和相关领域的研究动态
        一、 干细胞研究
            (一) 干细胞的特征，分类和研究意义
            (二) 传统干细胞的应用
            (三) 干细胞研究的新进展-骨髓干细胞的横向分化及初步应用
        二、 胎肝干细胞(造血干细胞)的生物学特性
        三、 肾脏组织功能衰竭及其治疗
第一部分 小鼠胎肝Sca-1⁺细胞的分化潜能
    一、 实验材料
    二、 实验方法
        1 胎肝细胞悬液制备
        2 快速PCR扩增鉴定胎鼠性别
        3 MACS分离Sac-1⁺细胞
        4 细胞计数
        5 台盼蓝排除法计数活细胞
        6 胎肝Sca-1⁺细胞移植
        7 胎肝Sca-1⁺细胞移植后造血重建的观察
        8 组织取材、固定、包埋及切片
        9 碱性磷酸酶标记免疫组织化学染色
        10 小鼠Y染色体荧光原位杂交
        11 统计学处理
    三、 实验结果
        1 雄性胎肝Sca-1⁺细胞制备情况
        2 雄性胎肝Sca-1⁺细胞移植结果
        3 雄性胎肝Sca-1⁺细胞的分化
    四、 讨论
    五、 第一部分图像结果
第二部分 小鼠急性肾功能衰竭模型及G-CSF的作用
    一、 实验材料
    二、 实验方法
        1 建立小鼠急性肾功能衰竭模型
        2 G-CSF处理
        3 肾组织切片HE染色
        4 小鼠血清尿素氮含量测定-GLDH法
        5 小鼠血清肌酐含量测定-苦味酸速率法
        6 肾组织切片的观察和统计处理
    三、 实验结果
        1 肾组织切片病变测定结果
        2 不同剂量甘油对实验小鼠的作用
        3 甘油注射后不同时间血清肌酐和尿素氮浓度
        4 G-CSF注射后血清肌酐和尿素氮浓度
        5 G-CSF注射后肾脏组织切片的病理变化
        6 实验小鼠的生存情况
    四、 讨论
    五、 第二部分图像结果
第三部分 小鼠胎肝Sca-1⁺细胞在肾功能损伤修复中的作用
    一、 实验材料
    二、 实验方法
        1 动物实验
        2 Y染色体FISH分析
    三、 实验结果
        1 FITC标记Y染色体常染色质FISH
        2 受体小鼠肾组织切片中的Y染色体阳性细胞
        3 诱导组小鼠肾组织切片中的Y染色体阳性细胞
        4 输注组小鼠肾组织切片中的Y染色体阳性细胞
        5 实验小鼠的存活情况
    四、 讨论
    五、 第四部分图像结果
第四部分 胎肝与骨髓Sca-1⁺细胞向肾组织细胞潜能的比较
    一、 实验材料
    二、 实验方法
        1 动物实验
        2 Y染色体FISH分析
        3 PCR扩增分析肾组织SRY基因
    三、 实验结果
        1 ARF模型小鼠肾组织切片中的Y染色体阳性细胞
        2 ARF模型小鼠肾组织基因组中的SRY基因
    四、 讨论
结论和建议
参考资料



本文编号：3905569