恶性疟原虫红内期若干保护性抗原基因真核表达重组质粒的构建及其免疫特性研究

发布时间：2024-02-24 01:16

　　疟疾仍然是全球最重要的感染性疾病之一，每年有近2百万人死于该病，其中大多死于恶性疟。由于疟原虫抗药性和蚊媒耐药性的不断扩展，疟疾药物防治面临困境，研制有效的抗疟疫苗是当前的迫切需要。而新型疫苗—核酸疫苗(主要为DNA疫苗)的出现为研制疟疾疫苗带来极大的希望。以美国海军医学研究所Hoffman SL为首自1994年开始研究疟疾红外期DNA疫苗，至今已取得可喜的结果。而有效的疟疾疫苗应为包含红内期、红外期和传播阻断期各期抗原基因的复合型疫苗。我教研室自1995年开始在TDR和全军医药卫生青年基金的资助下，开展疟疾红内期DNA疫苗研究。 本研究选择已证明具有明显保护性的恶性疟原虫红内期若干抗原的基因片段作为DNA疫苗的外源基因，它们是裂殖子表面蛋白1(MSP1)的17区基因片段(简称MSP1-17)，MSP1内编码42kd蛋白的15-17区基因片段，富含组氨酸蛋白2(HRPⅡ)基因片段和编码多个T／B细胞表位的合成杂合基因片段(含MSP1、MSA2、RESA、IL-1和TT的T／B细胞表位，简称HG)。本课题主要进行了如下研究工作： 1) 真核表达重组质粒的构建：首先PCR扩...

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图1-12%琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR产物

1.4扩增产物的克隆和测序[‘381PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳后，低温点琼脂糖凝胶回收约30OPb左右的区带，经幻neow酶两端补平后，用asll和BmaHI酶切，将酶切后的PCR产物与经相同酶切的pUC18连接，连接产物转化氯化钙制备的新鲜感受态.EocliJM109菌，涂....

图1一2阳性克隆的PCR鉴定(2%琼脂糖电泳)

.22扩增片段的克隆及鉴定挑取PCR产物与pUC18的连接产物转化后的若干个白色菌落进行PCR鉴定，结果含三株恶性疟原虫扩增片段的重组克隆均得到阳性结果(图1-2)，将PCR鉴定阳性的克隆进行Sall和BnalHl酶切鉴定结果，可见重组克隆均切出300bp大小的片段(图1一3)。....

图1一3PCR鉴定阳性重组子的酶切鉴定l为pGEMEx一7ZfHaelll标准分子量;2、3和4为PeR鉴定阳性的

.22扩增片段的克隆及鉴定挑取PCR产物与pUC18的连接产物转化后的若干个白色菌落进行PCR鉴定，结果含三株恶性疟原虫扩增片段的重组克隆均得到阳性结果(图1-2)，将PCR鉴定阳性的克隆进行Sall和BnalHl酶切鉴定结果，可见重组克隆均切出300bp大小的片段(图1一3)。....

图1一4MSPI一17测序结果(仅示FUP株测序结果)

.3阳性克隆序列测定及序列比较对阳性克隆插入片段进行基因序列测定(图1一4)。与己知的17区基因比较，确为所需的恶性疟原虫MSPl7l区基因。所测序列两端含有PCR引物序列、正确的酶切位点、起始码和终止码。经比较，三株恶性疟原虫MSPI17区基因序列基本相同，其中海南株和FUP株....

本文编号：3908286