过表达心肌细胞转录因子骨髓间充质干细胞分泌外泌体抗心肌细胞凋亡的分子调控机制

发布时间：2024-03-04 04:42

　　目的过表达心肌细胞转录因子(GATA-4)的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分泌的外泌体(BMSCGATA-4-exosome可能是修复心肌损伤的关键分子,文章探讨过表达GATA-4小鼠BMSC分泌外泌体(BMSCGATA-4exosome)抑制心肌细胞凋亡的分子调控网络。方法在过表达GATA-4小鼠BMSC培养体系内加入miR-330-3p模拟剂(miR-330-3p-mimic)提取分泌的exosome与心肌细胞在低氧无血清条件下培养24h作为实验组(过表达miR-330-3p组),将过表达GATA-4组、空载体组、BMSC组作为混杂因素对照,同时将在低氧无血清条件下单独培养24h的心肌细胞及在正常条件下单独培养24h的心肌细胞作为阳性及阴性对照组。采用流式细胞技术检测各组心肌细胞的凋亡率。采用RT-PCR检测各组心肌细胞内miR-330-3p的表达量。并根据microRNA靶基因预测结果采用Western blot检测miR-330-3p对应靶基因Ap2m1及Cnot4转录蛋白表达。结果超过90%小鼠的BMSC表达CD29(表达率为99.71%)、CD44(表达率为97.28%)...

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【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 实验材料
    1.2 实验方法
        1.2.1 小鼠BMSC的分离和培养及鉴定
        1.2.2 慢病毒载体及基因开启技术构建过表达GATA-4 BMSCs
        1.2.3 细胞的分组及处理
        1.2.4 采用RT-PCR方法检测
        1.2.5 根据基因库推测miR-330-3p的靶基因
        1.2.6 用流式细胞技术检测细胞凋亡率和West-ern blot技术检测Ap2m1、Cnot4的表达
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 小鼠BMSCsCD29、CD44及SCA-1的表达
    2.2 各组细胞的凋亡率及心肌细胞内miR-330-3p的表达比较
    2.3 各组心肌细胞中Ap2m1和Cnot4的表达水平
3 讨论



本文编号：3918917