金黄色葡萄球菌前噬菌体PT1028ORF001基因的生物信息学分析及原核表达

发布时间：2024-03-16 00:45

　　[目的]对金黄色葡萄球菌前噬菌体的PT1028ORF001基因进行生物信息学分析,并进行原核表达,为金黄色葡萄球菌前噬菌体基因的功能研究提供参考数据。[方法]将金黄色葡萄球菌ATCC 25923菌株功能未知的基因通过BLAST比对,从中发现了一个噬菌体PT1028的基因序列,将该基因命名为PT1028ORF001。使用Protparam、Prot Comp9. 0、NCBI保守结构域数据库、TMpred、Net Phos 3. 1 Server、PSIPRED、SWISS-MODEL等在线生物信息软件,分析PT1028ORF001蛋白的理化性质、亚细胞定位、保守结构域、跨膜区域、磷酸化修饰位点、二级结构和三维结构。用自行设计的引物扩增PT1028ORF001基因,扩增产物经酶切回收后与原核表达载体p ET-32a相连接,构建重组表达质粒,将该重组质粒转化E. coli TG1内,经菌落PCR鉴定后,增菌培养并提取质粒,再转化E. coli BL21 (DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测分析。[结果]PT1028ORF001蛋白由569个氨基酸组成,相对分子质量为64...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验材料
        1.1.2 试剂
        1.1.3 仪器
    1.2 方法
        1.2.1 分析PT1028ORF001蛋白的特征及亚细胞定位
        1.2.2 分析保守结构域
        1.2.3 预测跨膜区
        1.2.4 分析磷酸化修饰位点
        1.2.5 预测PT1028ORF001蛋白的二级结构
        1.2.6 预测PT1028ORF001蛋白的三维结构
        1.2.7 PT1028ORF001基因的扩增与重组表达载体的构建
        1.2.8 PT1028ORF001基因的诱导表达
2 结果与分析
    2.1 PT1028ORF001蛋白的特征及亚细胞定位
    2.2 保守结构域分析
    2.3 跨膜区预测
    2.4 磷酸化修饰位点分析
    2.5 PT1028ORF001蛋白的二级结构
    2.6 PT1028ORF001蛋白的三维结构
    2.7 PT1028ORF001基因扩增与重组表达载体的构建
    2.8 重组蛋白获得了表达
3 讨论



本文编号：3928859