异质cell-in-cell结构的生物学特征及效应研究

发布时间：2024-03-28 03:52

　　细胞钻细胞（cell-in-cell）是指一个或多个细胞进入到另一个细胞的胞浆内，形成细胞套叠结构的现象（下文以“效应细胞”表示钻入另一细胞中的细胞；“靶细胞”表示被钻入的外层细胞）。Cell-in-cell从效靶细胞种类可以分为同质cell-in-cell和异质cell-in-cell；而从生物学特征及意义可以分为cannibalism，entosis和emperipolesis。我们的研究团队主要是对于emperipolesis，即淋巴细胞进入各种肿瘤细胞进行了较为深入的研究。 以往cell-in-cell的研究大多是建立在单个细胞水平上，我们试图从群体水平建立异质cell-in-cell的研究方法。首先，我们运用荧光染色和流式细胞仪检测异质cell-in-cell形成率，与人工计数方法相比具有高度拟合性（r2=0.9918），同时这一方法具有高效、准确、重复性好的特点；其次，我们用这一方法与人工计数检测了多个效靶细胞形成cell-in-cell的概率，说明其具有普适性。再次，我们用流式细胞仪能够分选出高纯度（约为85%）的cell-in-cell细胞群，将这一细胞群继续培养后对其...

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【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文对照和缩略词表
第一章 绪论
    1.1 Cell-in-cell生物学结构的研究
        1.1.1 Cell-in-cell形态学特征和分类
        1.1.2 Cell-in-cell的形成机制及命运
        1.1.3 Cell-in-cell的生物学功能及意义
    1.2 Cell-in-cell的研究方法
        1.2.1 在单个细胞水平cell-in-cell的方法学建立
        1.2.2 在群体水平cell-in-cell的方法学建立
    1.3 Cell-in-cell与单克隆抗体治疗
        1.3.1 单克隆抗体抗肿瘤机制
        1.3.2 单克隆抗体的临床应用
    1.4 本课题的目的意义和研究内容
        1.4.1 目的意义
        1.4.2 研究内容
第二章 Emperipolesis的流式检测与分选方法学建立
    2.1 前言
    2.2 材料与方法
        2.2.1 实验材料
        2.2.2 Emperipolesis反应体系的建立
        2.2.3 Emperipolesis人工计数
        2.2.4 Emperipolesis流式计数与分选
        2.2.5 Giemsa染色
        2.2.6 活细胞实时观测和缩时电影摄制
        2.2.7 异质cell-in-cell单个细胞分选及克隆团形成
        2.2.8 杀伤实验（LDH释放法）
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 单细胞悬液制备的优化
        2.3.2 运用荧光染色和流式双色分析检测并分选Emperipolesis形成的cell-in-cell结构
        2.3.3 测定流式细胞仪检测异质cell-in-cell细胞群的准确率
        2.3.4 流式检测及人工计数不同效靶细胞通过emperipolesis形成异质cell-in-cell概率
        2.3.5 流式分选的cell-in-cell细胞群的二次cell-in-cell形成及杀伤敏感性
        2.3.6 检测流式分选的cell-in-cell细胞群与EMT转化
    2.4 本章小结
第三章 异质cell-in-cell的形态及动力学研究
    3.1 前言
    3.2 材料与方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 异质cell-in-cell检测
        3.2.3 表面生物素酰化
        3.2.4 Lyso Tracker和Mito Tracker染色
        3.2.5 透射电镜标本的制作
        3.2.6 缩时显微摄影time-lapse技术
        3.2.7 免疫荧光染色
        3.2.8 Wsetern blot
        3.2.9 Transwell方法检测细胞迁移率
        3.2.10 细胞饥饿实验
        3.2.11 趋化因子检测
        3.2.12 细胞转染
        3.2.13 流式细胞术检测样品
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 Cell-in-cell形态学研究
        3.3.2 Cell-in-cell有别于细胞吞噬
        3.3.3 效应细胞在cell-in-cell形成中的极化
        3.3.4 细胞骨架重排影响效应细胞在cell-in-cell形成中的极化
        3.3.5 信号通路影响效应细胞极化
        3.3.6 趋化因子影响效应细胞极化
    3.4 本章小结
第四章 异质cell-in-cell的细胞生物学效应
    4.1 前言
    4.2 材料与方法
        4.2.1 实验材料
        4.2.2 异质cell-in-cell检测
        4.2.3 效靶细胞死亡计数
        4.2.4 Lyso Tracker和Mito Tracker染色
        4.2.5 PEG诱导多倍体形成
        4.2.6 缩时显微摄影time-lapse技术
        4.2.7 免疫荧光染色
        4.2.8 囊泡形成的计数
        4.2.9 多倍体分选
        4.2.10 组织标本的处理及HE染色
        4.2.11 组织切片免疫荧光染色
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 Cell-in-cell与效应细胞胞内分裂
        4.3.2 异质cell-in-cell与靶细胞异倍体形成
        4.3.3 异质cell-in-cell与多倍体靶细胞
        4.3.4 异质cell-in-cell与效靶细胞死亡
        4.3.5 囊泡与异质Cell-in-cel的效靶细胞死亡
        4.3.6 Cell-in-cell与疾病
    4.4 本章小结
第五章 抗体介导的cell-in-cell效应
    5.1 前言
    5.2 材料与方法
        5.2.1 实验材料
        5.2.2 PBMC的提纯
        5.2.3 乳腺癌细胞抗原检测
        5.2.4 PBMC的(Fc-gamma receptors) FcγRⅢ测定
        5.2.5 ADCC检测
    5.3 结果与讨论
        5.3.1 检测靶细胞Her2 抗原及效应细胞Fc受体的表达
        5.3.2 不同抗体浓度下的ADCC及cell-in-cell效应
        5.3.3 不同作用时间下的ADCC及cell-in-cell效应
        5.3.4 抗体介导的异质cell-in-cell的胞内杀伤和胞内死亡
        5.3.5 囊泡对抗体介导的胞内杀伤和胞内死亡的影响
    5.4 本章小结
结论与展望
    结论
    创新性成果
    展望
参考文献
攻读博士学位期间取得的研究成果
致谢
附件



本文编号：3940958