用LMP1构建重组慢病毒载体及建立转基因小鼠模型

发布时间：2024-04-06 17:18

　　EB病毒与多种人类肿瘤相关，尤其与鼻咽癌密切相关，但由于缺乏实验动物学方面的证据，EB病毒在鼻咽癌的发生、发展中所起的作用一直是研究的热点。但至今尚未能用EB病毒或其致瘤基因建立鼻咽癌动物模型，分析原因，我们认为主要与没有利用鼻咽组织相对特异性启动子有关。为了解决这一问题，本研究利用嗜上皮细胞特异性启动子ED-L2，携带增强型绿色荧光蛋白报告基因(enhanced green fluorescent protein,EGFP)与EB病毒潜伏膜蛋白(LMP1)，构建融合蛋白基因载体。本研究拟分别构建ED-L2-EGFP慢病毒表达载体、ED-L2-N-LMP1-EGFP慢病毒表达载体、ED-L2-B-LMP1-EGFP慢病毒表达载体；将EB病毒潜伏膜蛋白(LMP1)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作为目的基因，通过显微注射技术，建立携带靶基因的转基因小鼠，为进一步建立鼻咽癌动物模型探索新途径。 研究内容及结果如下： 一、成功构建了ED-L2-EGFP慢病毒载体、ED-L2-N-LMP1-EGFP慢病毒载体、ED-L2-B-LMP1-EGFP慢病毒表达载体 以pED-L2-...

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图6:c一FUGW质粒PacFBamHI双酶切鉴定

并切胶回收载体片段，可见8687bP的载体片段及1254bP的泛素启动子序列。(见图6)234﹃﹃7s0bP啊250bPl000p激而帅溉师!3l:941哪436232202564图6:c一FUGW质粒PacFBamHI双酶切鉴定Lanel:HindlllMarkLaneZ:eF....

图10:ED一LZ币ue118质粒ane:n

lanel:DL2000MarklaneZ:胶回收ED一LZ片段782bP5.ED一L2一puclls载体连接后提取质粒1%琼脂糖凝胶电泳(见图10)123爵璐溉冲旧416川川322027晰图10:ED一LZ币ue118质粒lanel:HindlllMark一aneZ:ED一LZ....

图11:ED一LZ一EorP慢病毒质粒

6.重组载体质粒(9469bP)1%琼脂糖凝胶电泳。(见图11)2345珊撒s64bP图11:ED一LZ一EorP慢病毒质粒lanel:HindlllMarklaneZ，3，4，5:Eo一LZ一EJP慢病毒质粒9469饰7.测序验证ED一LZ启动子(见图12)图12:ED一LZ启....

图12:ED一LZ启动子序列测序结果

lanel:HindlllMarklaneZ，3，4，5:Eo一LZ一EJP慢病毒质粒9469饰7.测序验证ED一LZ启动子(见图12)图12:ED一LZ启动子序列测序结果25

本文编号：3946935