丹参酮ⅡA对PD模型小鼠DA能神经元的保护作用及其机制

发布时间：2017-05-26 09:25

  本文关键词：丹参酮ⅡA对PD模型小鼠DA能神经元的保护作用及其机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的研究丹参酮ⅡA对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahy-dropyridine, MPTP）所致帕金森病（Parkinson’s disease, PD）模型小鼠黑质中酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase, TH）、CD11b、p47-phox、诱导型一氧化氮合酶（Inducible Nitric Oxide Synthase, iNOS）表达的影响，以探讨丹参酮ⅡA对多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。 方法健康雄性C57BL/6N小鼠120只，随机分为6组，每组20只。（1）模型3d组：腹腔注射MPTP（20mg/kg，生理盐水溶解），1次/2h，连续4次，于最后一次注射MPTP后12h注射5mg/ml的二甲基亚砜（Dimethyl sulfoxide, DMSO），每天一次，连续3天，最后一次注射MPTP后3天取材；（2）模型7d组：腹腔注射MPTP（20mg/kg，生理盐水溶解），1次/2h，连续4次，于最后一次注射MPTP后12h注射5mg/ml的DMSO，每天一次，连续7天，最后一次注射MPTP后7天取材；（3）丹参酮ⅡA干预3d组：除给予模型3d组相同的MPTP处理外，最后一次注射MPTP后12h给予丹参酮ⅡA（25mg/kg体重量，溶于5mg/ml的DMSO，腹腔注射），每天一次，连续3天，最后一次注射MPTP后第3天取材；（4）丹参酮ⅡA干预7d组：除给予模型7d组相同的MPTP处理外，最后一次注射MPTP后12h给予丹参酮ⅡA（25mg/kg体重量，溶于5mg/ml的DMSO，腹腔注射），每天一次，连续7天，最后一次注射MPTP后第7天取材；（5）对照3d组：腹腔注射与模型组和干预组等量的生理盐水，1次/2h，连续4次，最后一次注射生理盐水后12h注射与模型组和干预组等量的DMSO，每天一次，连续3天，于最后一次注射生理盐水后3天取材；（6）对照7d组：腹腔注射与模型组和干预组等量的生理盐水，1次/2h，连续4次，最后一次注射生理盐水后12h注射与模型组和干预组等量的DMSO，每天一次，连续7天，于最后一次注射生理盐水后7天取材。采用免疫组织化学法观察各组小鼠黑质区酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经元数量，纹状体TH阳性神经纤维密度，黑质区CD11b、p47-phox、iNOS免疫反应阳性细胞数量变化，，采用免疫蛋白印迹法检测中脑黑质区TH、CD11b、p47-phox、iNOS表达水平的变化。采用计算机图像分析法对免疫组化染色阳性细胞数量和蛋白印迹特异性蛋白条带进行半定量分析。所有数据采用SPSS13.0统计分析软件进行统计学处理。 结果与对照组小鼠相比，模型组小鼠出现典型PD症状，在MPTP最后一次注射后3d，黑质区CD11b（12.33±1.00vs3.11±0.78）、p47-phox（101.45±48.12vs30.40±6.06）、iNOS（88.17±27.45vs47.46±4.60）阳性细胞显著增加（P＜0.05），蛋白水平亦随之升高；在MPTP最后一次注射后7d黑质区TH阳性神经元显著丢失50%（82.60±35.45vs173.59±5.60），蛋白水平下降；经丹参酮ⅡA处理后，模型小鼠PD症状减轻，与模型组相比，在MPTP最后一次注射后3d，黑质区CD11b （4.89±1.16vs12.33±1.00）、 p47-phox （76.61±25.56vs101.45±48.12）、iNOS（69.96±16.28vs88.17±27.45）阳性细胞明显减少（P＜0.05），蛋白水平出现下降；在MPTP最后一次注射后7d，TH阳性细胞数与对照组相比仅下降25%（115.09±23.78vs173.59±5.60），蛋白水平下降程度亦得以减轻。 结论在MPTP所致急性小鼠PD模型中丹参酮ⅡA具有保护黑质纹状体多巴胺能神经元的作用，其保护作用可能与抑制小胶质细胞激活，抑制NADPH氧化酶、iNOS表达有关。
【关键词】：帕金森病 1-甲基-4-苯基-1 2 3 6四氢吡啶 酪氨酸羟化酶 CD11b NADPH氧化酶 诱导型一氧化氮合酶 小鼠
【学位授予单位】：河北联合大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R742.5;R-332
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略表10-11
• 引言11-12
• 第1章 实验研究12-44
• 1.1 材料与方法12-22
• 1.1.1 实验材料12-15
• 1.1.2 实验方法15-22
• 1.2 结果22-37
• 1.2.1 行为学观察结果22-23
• 1.2.2 中脑黑质区组织病理学结果23-24
• 1.2.3 免疫组织化学（SP 法）检测结果24-31
• 1.2.4 免疫荧光双标记法检测结果31-32
• 1.2.5 免疫印迹法检测结果32-37
• 1.3 讨论37-41
• 1.3.1 动物模型评价37-38
• 1.3.2 小胶质细胞与帕金森病38
• 1.3.3 NADPH 氧化酶、iNOS 与帕金森病38-39
• 1.3.4 多巴胺能神经元自身表达 NADPH 氧化酶和 iNOS39-40
• 1.3.5 丹参酮ⅡA 与帕金森病40-41
• 1.4 结论41
• 参考文献41-44
• 第2章 综述神经炎症和小胶质细胞在帕金森病中的作用及治疗前景44-55
• 2.1 神经炎症与帕金森病44-49
• 2.1.1 在人群中的研究44-46
• 2.1.2 在动物模型中的研究46-49
• 2.2 小胶质细胞与帕金森病49-51
• 2.2.1 小胶质细胞参与炎症反应49
• 2.2.2 小胶质细胞参与氧化应激49-51
• 2.3 帕金森病的治疗前景51
• 2.4 结语51
• 参考文献51-55
• 致谢55-56
• 导师简介56-57
• 作者简介57-58
• 学位论文数据集58

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