猪胰岛素启动子报告系统的构建及其在胰岛间充质干细胞诱导分化检测中的应用

发布时间：2017-05-26 15:06

  本文关键词：猪胰岛素启动子报告系统的构建及其在胰岛间充质干细胞诱导分化检测中的应用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：为了构建猪胰岛素启动子(IP)-绿色荧光蛋白(GFP)报告系统,评价其在胰岛间充质干细胞(PIMSCs)诱导分化过程中的应用价值,试验以胎猪胰腺组织基因组DNA为模板,PCR扩增获得IP基因片段,T载体连接测序后,构建p EGFP-IP重组质粒,经PCR和双酶切鉴定后,分别转染原代胎猪胰腺细胞和PIMSCs,48 h后观察荧光表达情况,转染重组质粒的PIMSCs体外诱导2周后,观察绿色荧光表达情况,并进行GFP和胰岛素的Western-blot检测。结果表明:PCR扩增得到1条659 bp大小的基因片段,其测序结果与Gen Bank公布的IP基因序列一致。经PCR和双酶切鉴定,p EGFPIP重组质粒构建成功。重组质粒转染48 h后,部分原代胎猪胰腺细胞强表达绿色荧光,而PIMSCs则不表达。诱导2周后,部分PIMSCs表达绿色荧光,同时随着绿色荧光的表达增强,其胰岛素表达也相应增强。说明成功构建出了猪胰岛素启动子-绿色荧光蛋白报告系统,该报告系统具有表达特异性,可用于检测由PIMSCs诱导分化得到的胰岛素分泌细胞。
【作者单位】： 宁夏医科大学检验学院;西北农林科技大学国家干细胞研究中心陕西省分中心;宁夏医科大学实验动物中心;
【关键词】： 胰岛素启动子 胰岛间充质干细胞 猪 载体构建 诱导分化
【基金】：国家自然科学基金项目(30671067) 宁夏回族自治区卫生厅项目(2012024) 宁夏医科大学面上项目(XM2011008)
【分类号】：R3416
【正文快照】： 细胞替代疗法在糖尿病治疗过程中呈现出了巨大的潜力,已有研究者通过体外诱导分化由干细胞得到了胰岛素分泌细胞,并取得了一定的移植治疗效果[1-2]。然而,该方法的应用受到了供体细胞来源不足、细胞移植免疫排斥、体外诱导分化效率低以及移植后成瘤等因素的制约。由于猪的胰岛

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本文编号：397193