基因转染RP105抑制TLR4对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护及机制研究

发布时间：2024-05-14 01:16

　　目的：本项目通过构建携带RP105基因的复制缺陷型重组腺病毒载体，间接冠脉在体转染大鼠心肌，使RP105在心肌组织高表达，在大鼠在体心脏缺血再灌注模型中，以TLR-4信号通路为切入点，从基因表达、蛋白合成等多个层次研究RP105对心肌缺血再灌注损伤的保护作用，探讨其分子机制。 方法： SPF级雄性SD大鼠40只，随机分为4组(n=10)：生理盐水+假手术组(Sham组，只穿线不结扎)、生理盐水+缺血再灌注组(I/R组）、Ad-RP105+缺血再灌注组(Ad-R组)、Ad-GFP+缺血再灌注组(Ad-G组)。重组腺病毒间接冠状动脉转染大鼠心肌，3d后建立心肌缺血再灌注模型。术后2h空气栓塞法处死大鼠，采用光镜观察心肌组织的病理形态学改变；Evans blue和TTC双染法估测心肌梗死面积；酶联免疫吸附试验(ELISA)测定心肌TNF-α和IL-6的含量；Real-time PCR和Western blot检测心肌RP105、TLR-4、MyD88、 NF-κB mRNA水平和蛋白表达情况。 结果：(1)采用携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad-GFP)成功转染大鼠在体心肌，结果显示，大...

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图3：大鼠心肌腺病毒成功转染后的绿色荧光表达成功

大鼠心肌腺病毒成功转染后的绿色荧光表模型的成功构建评估：在血管结扎即刻，肢体Ⅱ导联明缺血模型构建成功；松开结扎线，可。本次动物实验造模进展顺利，在结电图出现S-T段显著抬高，QRS波增失常，如多为室性心律失常，部分大鼠验造模中，40只大鼠中因为麻醉过量成功率达到95%。....

图4大鼠各时间段心电图表现（Ⅱ导联）

说明成功再灌。本次动物实验造模进展顺利，在结扎即刻，可见心尖由于缺血变白，肢体导联心电图出现S-T段显著抬高，QRS波增高、变宽；结扎血管后6-8min开始出现心律失常，如多为室性心律失常，部分大鼠甚至发生室颤，可用利多卡因抢救；在本次实验造模中，40只大鼠中因为麻醉过....

图5各组心肌光学显微镜下组织病理改变(HE,×100)

Ad-R组Ad-G组图5各组心肌光学显微镜下组织病理改变(HE,×100)2.2心肌梗死面积的检测心肌梗死面积是评价心肌梗死严重程度的一个金标准。本实验应用Evansblue和TTC双染法进行心肌染色[22]，计算机图像分析系统计算心肌缺血和梗死面积；梗死面....

图6各组大鼠心注：左图从上到下依次为IR组、Ad-R组、Ad

图6各组大鼠心注：左图从上到下依次为IR组、Ad-R组、A柱状图，与IR组相比，★P<0.05第三部分ELISA测定大鼠心肌ELISA测定的大鼠缺血再灌注前后心3所示，与Sham组相比，缺血再灌注损增多，但是IR组与Ad-G组较Sham组显....

本文编号：3972979