P2X7受体拮抗剂BBG对阿尔茨海默病模型鼠海马神经元突触发育和认知功能的影响

发布时间：2017-05-26 19:04

  本文关键词：P2X7受体拮抗剂BBG对阿尔茨海默病模型鼠海马神经元突触发育和认知功能的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的1、研究P2X7受体对可溶性寡聚体β淀粉样蛋白42（SOAβ42）诱导的大鼠海马神经元突触发育的影响，包括寡聚体Aβ42处理、P2X7受体拮抗剂BBG(Brilliant BlueG)处理对神经元树突丝的长度、密度，树突棘的密度及树突树的发育情况的影响。2、研究APPPS1转基因小鼠海马区P2X7受体的表达相对于正常小鼠是否上调，随着AD（Alzheimer’s disease,AD）病理过程的改变P2X7受体在小鼠海马区表达情况的变化。3、研究P2X7受体拮抗剂BBG腹腔注射对AD小鼠学习记忆的影响。研究P2X7受体与AD的关系，为AD病理机制的研究提供实验依据，为AD的治疗寻找新的潜在的药物靶点。 方法1、采用第1天出生的Wistar大鼠的海马回做原代神经元培养。在体外培养第5天（day5invitro, DIV5），用定位在膜上的绿色荧光蛋白（F-GFP）和GFP标记的肌动蛋白（GFP-actin）对神经元进行共转染，以显示神经元树突、轴突整个形态学细节；在DIV7和DIV14，实验组给予神经元SO Aβ42孵育3h，干预组在给予SOAβ42孵育前对神经元给予BBG预孵育24h。通过活细胞成像方法对各试验组DIV7神经元树突丝的密度、长度、树突树的发育以及DIV14神经元树突棘密度的情况进行成像分析。2、PCR方法对APPPS1转基因小鼠进行鉴定；提取total RNA，反转录成cDNA，Real-time PCR方法检测海马组织P2X7受体的相对表达量。3、ICR小鼠海马CA1区脑立体定位注射Aβ42，制作AD模型，腹腔注射BBG，新物体识别、水迷宫、强迫游泳行为学实验检测对学习记忆以及抑郁的影响。 结果1、SOAβ42处理对大鼠海马神经元对树突树总长度、分支个数及各级分支均没有影响；SOAβ42处理对大鼠海马神经元树突丝长度没有影响，但能够显著降低树突丝的密度，而BBG处理之后能够逆转SO Aβ42引起的树突丝密度降低。SO Aβ42处理显著的降低大鼠海马神经元树突棘的密度，SOAβ42处理之前孵育BBG24小时能够逆转SO Aβ42引起的树突棘密度降低。2、P2X7受体在APPPS1转基因鼠海马中随着年龄增大表达呈先上调后下调趋势，并且和同龄小鼠比较表达无差异。3、BBG腹腔注射显著改善小鼠的学习记忆能力，并且对缓解抑郁有一定的作用。 结论SO Aβ42处理对大鼠海马神经元突触发育造成损伤，，导致树突丝、树突棘密度的下降，P2X7拮抗剂BBG处理能够逆转SO Aβ42介导的突触损伤，这可能与抑制P2X7受体的表达有关，P2X7受体的表达在AD病理过程中表现出峰值现象，P2X7受体参与了AD的病理过程。
【关键词】：P2X7 β淀粉样蛋白 海马 阿尔茨海默病
【学位授予单位】：宁波大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R749.16;R-332
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-13
• 1 实验材料13-17
• 1.1 质粒提取材料13
• 1.1.1 质粒提取用试剂13
• 1.1.2 质粒提取用培养基13
• 1.2 细胞培养用试剂13-14
• 1.3 分子生物学试剂14
• 1.4 药物14
• 1.5 试剂盒14
• 1.6 常用溶液配方14-15
• 1.7 实验动物15
• 1.8 实验用仪器设备15-17
• 2 实验方法17-23
• 2.1 细胞培养实验方法17-19
• 2.1.1 SO Aβ_(42)的配制和检测17
• 2.1.2 原代海马神经元的培养17-18
• 2.1.3 神经元转染18
• 2.1.4 药物处理18-19
• 2.2 APP&PS1 转基因鼠的鉴定19-20
• 2.2.1 DNA 提取19
• 2.2.2 PCR 反应19-20
• 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳20
• 2.3 RNA 提取、转录及 RT-PCR20-21
• 2.3.1 RNA 提取20
• 2.3.2 RNA 转录20
• 2.3.3 RT-PCR20-21
• 2.3.4 统计分析21
• 2.4 行为学实验方法21-23
• 2.4.1 新物体识别21
• 2.4.2 强迫游泳21
• 2.4.3 水迷宫实验21-23
• 3 实验结果23-39
• 3.1 SO Aβ_(42)、BBG 对海马神经元树突树的影响23-25
• 3.1.1 SO Aβ_(42)的鉴定23
• 3.1.2 SO Aβ_(42)、BBG 处理对神经元树突树长度、分支的影响23-25
• 3.2 SO Aβ_(42)、BBG 对海马神经元树突丝的影响25-27
• 3.2.1 SO Aβ_(42)、BBG 对海马神经元树突丝长度的影响25-26
• 3.2.2 SO Aβ_(42)、BBG 对海马神经元树突丝密度的影响26-27
• 3.3 SO Aβ_(42)、BBG 对海马神经元树突棘的影响27-28
• 3.4 APP&PS1 转基因鼠鉴定结果28-29
• 3.5 P2X7 受体在 APP&PS1 转基因鼠海马中的表达变化29-32
• 3.5.1 P2X7 受体在 APP&PS1 转基因鼠表达定性检测29-30
• 3.5.2 RT-PCR 实验的 GAPDH 和 P2X7 标准曲线30-31
• 3.5.3 P2X7 受体在 3 个时间点的表达31-32
• 3.6 新物体识别实验结果32-33
• 3.6.1 APP&PS1 转基因鼠新物体识别结果32-33
• 3.6.2 ICR 小鼠新物体识别结果33
• 3.7 强迫游泳实验结果33-34
• 3.8 水迷宫实验结果34-39
• 3.8.1 实验过程34-35
• 3.8.2 训练期轨迹图35
• 3.8.3 训练期小鼠逃避潜伏期35-36
• 3.8.4 探索期小鼠穿越目标象限的路程百分比36-37
• 3.8.5 探索期小鼠穿越原有平台位置的次数37-39
• 4 讨论39-42
• 5 结论42-43
• 参考文献43-46
• 综述46-57
• 参考文献53-57
• 在学研究成果57-58
• 致谢58

【共引文献】

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本文编号：397771