二甲双胍对Ⅱ型胶原诱导类风湿关节炎大鼠模型的抗炎及关节保护作用的研究

发布时间：2017-05-27 00:11

  本文关键词：二甲双胍对Ⅱ型胶原诱导类风湿关节炎大鼠模型的抗炎及关节保护作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景和目的 类风湿关节炎(Rheumatoidrthritis，RA)是一种以累及周围关节为主的，系统性、炎症性、自身免疫性疾病。致残率高，是造成我国人群丧失劳动力和致残的主要疾病之一。其病理特点为累及周身关节的增生性和侵蚀性滑膜炎，呈进行性病变，终生反复，最终导致关节侵蚀畸形、功能丧失。尽管RA的病因及发病机制尚未完全明确，但研究证实：RA滑膜组织中浸润的单核-巨噬细胞、淋巴细胞等能够产生大量的细胞因子，这些细胞因子通过作用于多种细胞并相互调节，形成一个复杂的网络，最终导致了类风湿关节炎的发生和发展。实验证实，TNF-α是在类风湿关节炎的发病机制中居于中心地位的炎症因子，它不仅能够通过NF-κB、JAK/STAT等通路介导RA的炎症及关节破坏反应，还可促使滑膜细胞、纤维母细胞、巨噬细胞等以自分泌或旁分泌的形式产生多种炎症因子，例如IL-1β、IL-6等，共同作用于类风湿关节炎的炎症及关节破坏反应。所以以TNF-α为靶点的TNF-α拮抗剂-依那西普(etanercept)、阿达木单抗（adalilmumab）等为代表的生物制剂的出现，被认为是RA治疗的革命性变化。但是生物制剂昂贵且生物安全性尚有待实验继续证实，所以未被广泛应用。而且目前标准RA用药包括非甾体类抗炎药（non-steroidalanti-inflammatorydrugs，NSAID）、激素、改善RA病情药物(disease-modifyingantirheumaticdrugs，DMARDs)并不能够改善患者远期症状并且有较强的毒副作用。所以，寻找新的改善RA病情药物仍然是临床面临的挑战性问题。近年来研究表明，二甲双胍不仅可以发挥全身性的抗炎作用，降低炎症因子水平，升高抗炎因子水平；还能够减弱炎症因子介导的软骨分解作用，维持体内软骨稳态，保护软骨；还可以调节成骨细胞的细胞因子的产生来抑制破骨细胞的生成，减少破骨细胞的分化，保护骨质；最终起到关节保护的作用。本研究拟在Ⅱ型胶原诱导类风湿关节炎大鼠模型上证实二甲双胍对类风湿关节炎大鼠模型具有抗炎和关节保护的作用。 目的 1.研究二甲双胍对Ⅱ型胶原诱导类风湿性关节炎大鼠模型的抗炎作用； 2.研究二甲双胍对Ⅱ型胶原诱导类风湿性关节炎大鼠模型的关节保护作用。 方法 1.于4℃下，将Ⅱ型胶原溶于0.01mol/L醋酸中，制成最终浓度为2mg/ml的混合液，静置过夜，待其完全溶解； 2.冰浴下，用高速匀浆机将混合液与完全弗氏佐剂以1:1相配比制成乳剂； 3.在大鼠尾部、肛周处皮肤多点皮内注射0.3ml乳剂，，实验第7日重复操作，加强诱导一次； 4.造模成功后，于实验第7日随机分组，给予各用药组高剂量二甲双胍(100mg/kg/d)，低剂量二甲双胍(50mg/kg/d)，甲氨蝶呤(2.7mg/kg/w)灌胃干预治疗； 5.每隔2日对各组大鼠进行关节炎评分及距骨宽度测量，于第28日处死取材，再进行大鼠踝关节X片，MICRO-CT三维数据重建，HE染色，大鼠血清中炎症因子水平及抗炎因子水平等检测。 结果 1.连续观察大鼠后足关节炎评分及距骨宽度测量示：高剂量二甲双胍组关节炎评分及距骨宽度较诱导组显著降低（P0.05），其余两用药组较诱导组也有一定降低关节炎评分及距骨宽度的作用（P0.05）； 2.Elisa结果示：诱导组大鼠血清中炎症因子TNF-α，IL-1β，IL-6水平显著升高，抗炎因子IL-10水平显著降低；高剂量二甲双胍治疗组可显著降低大鼠血清中炎症因子TNF-α，IL-1β，IL-6水平（P0.05），升高抗炎因子IL-10水平（P0.05）；低剂量组及甲氨蝶呤治疗组大鼠血清中炎症因子TNF-α，IL-1β，IL-6水平较诱导组有所降低（P0.05），抗炎因子IL-10水平也有升高（P0.05）。 3.X片示：诱导组出现严重的软组织肿胀和骨质吸收，关节结构破坏，严重损毁；高剂量二甲双胍组可显著保留关节结构并使其免受侵蚀，而低二甲双胍剂量组和甲氨蝶呤治疗组效果比高剂量二甲双胍组弱； 4.MICRO-CT结果示：诱导组出现严重的骨质吸收、溶解现象，骨质表面十分毛糙，并出现空洞，关节完全损毁；高剂量二甲双胍治疗组：未出现严重的骨质吸收、溶解现象，骨质表面有些毛糙、未出现空洞，关节结构保存完整；甲氨蝶呤治疗组及低剂量二甲双胍治疗组：同样出现出现严重的骨质吸收、溶解现象，骨质表面十分毛糙，同时大量出现骨质空洞，关节完全损毁，程度均较B组结果有所降低。 5.HE染色结果示：诱导组HE染色结果示：出现云片状炎症细胞，深染蓝色，炎症细胞严重侵蚀骨质，关节间隙消失，完全被炎症细胞填充；甲氨蝶呤治疗组及低剂量二甲双胍治疗组两组HE结果：出现大量炎症细胞，分布于关节间隙和软骨及骨质中，关节间隙分辨不清，炎症细胞同样严重侵蚀骨质，关节间隙几乎消失，被大量炎症细胞充斥；高剂量二甲双胍治疗组HE结果出现少量炎症细胞，，呈零星分布于关节间隙，关节间隙正常、清晰，炎症细胞未严重侵蚀骨质，粉红色软骨、深红色骨质均清晰可见，很少破坏。 结论 1.二甲双胍对Ⅱ型胶原诱导类风湿性关节炎大鼠模型具有剂量依赖性的抗炎作用。 2.二甲双胍对Ⅱ型胶原诱导类风湿性关节炎大鼠模型具有剂量依赖性的关节保护作用。
【关键词】：二甲双胍 Ⅱ型胶原 SD大鼠 类风湿关节炎 炎症 关节保护
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R593.22;R-332
【目录】：

• 缩略语表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 前言13-14
• 文献回顾14-26
• 1 实验材料26-28
• 1.1 实验动物26-27
• 1.2 主要实验试剂和设备27-28
• 2 实验方法28-29
• 2.1 大鼠类风湿关节炎诱导乳剂的制备28
• 2.2 实验分组及药物治疗方案28
• 2.3 类风湿关节炎大鼠模型的制备28-29
• 3 观测指标29-31
• 3.1 类风湿关节炎大鼠后足、踝关节大体观察29
• 3.2 大鼠类风湿关节炎评分测定29
• 3.3 大鼠距骨宽度测量29
• 3.4 ELISA法检测大鼠血清中炎症因子及抗炎因子含量29-30
• 3.5 大鼠后足踝关节X线片检查30
• 3.6 MICRO-CT重建30
• 3.7 HE染色30-31
• 3.8 统计学方法31
• 4 结果31-38
• 4.1 类风湿关节炎大鼠后足、踝关节大体观察结果31-32
• 4.2 大鼠类风湿关节炎评分测定结果32-33
• 4.3 距骨宽度测量结果33-34
• 4.4 ELISA法检测大鼠血清中炎症因子及抗炎因子含量结果34-35
• 4.5 大鼠后足踝关节X线片检查结果35
• 4.6 MICRO-CT重建结果35-36
• 4.7 HE染色结果36-38
• 5 讨论38-47
• 小结47-48
• 参考文献48-59
• 个人简历和研究成果59-60
• 致谢60

【共引文献】

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本文编号：398430