α-amanitin的分离鉴定及其致病机理研究

发布时间：2024-06-05 18:54

　　鹅膏菌属(Amanita)毒蕈原浆汁毒素根据其结构、性质主要分为鹅膏毒肽(amatoxins)、鬼笔毒肽(phallotoxins)和毒伞素(virotoxins)三类。这些毒肽都是环化小分子，化学性质稳定，具有极高的应用与研究价值，α-amanitin是其中含量最高的有毒多肽之一。它们在真核生物mRNA合成的专一性抑制、基因的组织结构和细胞定位、基因的表达与调控、细胞膜转运系统、细胞结构与功能、肿瘤和病毒的研究等领域具有广阔的应用前景。但是毒蕈资源有限，都是从野生子实体中分离获得，且不易分离纯化，所以现今的各类毒肽产品全部来自于欧美，价格昂贵。这大大限制了国内科研人员对毒肽的研究和利用。 利用反相HPLC和紫外吸收光谱分析从四川三江地区采集到的鳞柄白毒鹅膏菌(Amanita virosa)。鳞柄白毒鹅膏菌子实体H₂O抽提液在以0.02mol/L醋酸铵—乙腈为流动项的梯度洗脱模式下的RP-HPLC条件下，α-amanitin出峰时间约为12.22min，比较洗脱峰与α-amanitin标样浓度制成标准曲线(线性回归方程是Y=5159X+1097.4)，发现...

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2.4加端PCR反应两次加端PCR的扩增产物的凝胶电泳结果显示，在约950bp处可见一条清晰的核酸区带，与预期结果相一致(图1.7)。图1.7加端PCR产物电泳结果.Lanel:DL2000;LaneZ:第1次加端PCR的产物;Lane3:第2次加端PCR的产物2.5融合基因的构....

加端pCR终产物与载体pMD18一T相连，转化丑eoliJMlog，在含X一gal的LA平板中筛选后，提取质粒经Accm作用，产生一条约3.7bP的条带，约比pMD18一T载体长o.95kb(图1.8)。因pMD18一T载体上没有Acelll识别位点，这说明该质粒即为阳性重组子p....

图1.8重组子pMAT一1鉴定结果Lanel:人DNA/H办记111;LaneZ:pMD18一T自连;Lane3:pMAT一1;Lane4:PMAT一l/Aee111;Lanes:PMAT一1乙双汤al+Ban王Hl;Lane6:DMAT一1/BalnHI十尸‘tl图1.9重组子....

了凝血酶的识别和作用位点(图1.10、1.多克隆位点区序列图1.11重组子pGA达条件的研究不同受体菌中的表达比较T一l分别转化受体菌EeoliBLZI、DH5a(pH7.0)中，于37℃，1SOrpm培养到导4小时，结果显示重组质粒pGAT一同，在E.coliBLZI中表达量略....

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