幽门螺杆菌临床株cagA基因克隆及序列分析

发布时间：2017-05-28 02:05

  本文关键词：幽门螺杆菌临床株cagA基因克隆及序列分析，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的分离鉴定临床分离株幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp),分析其CagA蛋白的磷酸化基序EPIYA,探讨东亚株Hp CagA序列的结构特点。方法选取胃相关疾病患者的胃黏膜组织,剪碎后接种于哥伦比亚血琼脂平板,微需氧培养,菌落生长后通过尿素酶试验、革兰染色及显微镜检查对Hp进行初步鉴定。提取菌落基因组,PCR扩增Hp 16SrRNA基因并进行测序鉴定;扩增cagA基因全长序列,连接入pMD18-T载体。将重组质粒转入感受态E.coli DH5α,测序鉴定重组质粒,利用DNAStar和MEGA 6软件对cagA序列进行比对及聚类分析。结果成功分离Hp共26株。构建pMD18-T/cagA克隆载体后对26株Hp的cagA基因全长测序,序列比对分析显示有6株为西方型,20株为东亚型。东亚型CagA第815~834位点存在13个氨基酸的缺失、部分缺失或变异,西方型中有3株丢失磷酸化位点EPIYA-C;聚类分析显示Hp分离株分别聚类为东亚群、西方型东亚群以及西方群3群。结论 Hp分离株以东亚株为主,但也存在西方株感染;东、西方型CagA在EPIYA基序及侧翼序列显著差异,菌株之间存在聚类关系。
【作者单位】： 贵阳医学院分子生物学重点实验室;贵阳医学院基础医学院微生物教研室;
【关键词】： 幽门螺杆菌 CagA蛋白 EPIYA基序 聚类分析
【基金】：国家自然科学基金项目(No.81260303) 贵州省2011协同创新中心项目(黔教合协同创新中心[2014]06) 贵州省科技攻关计划基金项目(黔科合SY字[2011]3067号)
【分类号】：R378
【正文快照】： ***幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种螺杆状革兰阴性微需氧菌,具有高变异性和显著的地域流行差异,长期定植于人类胃肠道,是慢性胃炎、胃溃疡的主要致病因素之一,与胃癌的发生发展密切相关[1-3]。CagA(cytotoxin associated protein A)是目前已知的唯一能被Hp注入胃上

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本文编号：401655