脐带血造血干/祖细胞与脂肪干细胞共培养时作用距离的研究

发布时间：2025-01-04 01:33

　　造血干/祖细胞（hematopoietic stem progenitor cells,HSPCs）在治疗贫血等血液疾病、白血病等癌症病人的造血重建、基因治疗和免疫治疗等方面有极重要的临床应用价值,因此多年来一直得到科研工作者和临床医生的高度重视和关注。虽然前人对HSPCs的体外扩增已经做了大量的实验研究,但由于培养条件对HSPCs体外扩增的影响非常复杂,在不同的培养条件下,扩增效果差别很大,众多的影响参数均需要深入研究。 造血干/祖细胞与基质细胞共培养时的有效作用距离还是一个悬而未决的问题,为此,本文采用修正的transwell改变脐带血来源的造血干/祖细胞（HSPCs）和人脂肪组织来源的脂肪干细胞（adipose derived stem cells,ADSCs）的作用距离,获得最佳的细胞共培养距离。采用的方法是在无菌条件下采集正常足月产妇脐带血,与PBS缓冲液1:1等体积混合,利用Ficoll分离液（1.077g/ml）密度梯度离心（2500rpm,25min）收获单个核细胞（mononuclear cells,MNCs）。共培养时先将ADSCs以2×10～5cells/ml...

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【部分图文】：

图2.1单核细胞生长状态(0h，明场，放大100倍)

隔3d换液一次，细胞铺满瓶底，传代。2.2实验结果与讨论密度梯度离心法得到的单个核细胞如图2.1所示。由图可见，单核细胞大多呈圆形，细胞悬浮生长。由图2.2可见，第n代ADSCs培养24h后有稀疏分布的单个细胞开始贴壁生长，呈多角形或长梭形散布于瓶底。培养至72h时，贴壁细胞逐渐....

图2.2第11代ADSCs生长状态(A一ld，B--Zd，c--3d，卜4d，E--sd，P--6d，明场，放大100倍)

2.2实验结果与讨论密度梯度离心法得到的单个核细胞如图2.1所示。由图可见，单核细胞大多呈圆形，细胞悬浮生长。由图2.2可见，第n代ADSCs培养24h后有稀疏分布的单个细胞开始贴壁生长，呈多角形或长梭形散布于瓶底。培养至72h时，贴壁细胞逐渐增多，贴壁细胞形成集落，呈漩涡状、辐....

图3.4细胞不同间距CFU一GM扩增倍数F19.3.4exPansionfoldofCFU一GMatdifferentintervalbetweeneells

图3.4细胞不同间距CFU一GM扩增倍数F19.3.4exPansionfoldofCFU一GMatdifferentintervalbetweeneellsCFU一GM集落的扩增倍数与细胞间距的关系如图3.4示。可见，细胞共培养间距为350协m时，相应的单个核....

图3.7不同培养方式下扩增的脂肪干细胞向软骨细胞诱导14、21天后Toluldineblue染色(A，B:阴性对照;C，D:2Week;E，F:3week;C，E:恤well间接接触共培养;D，F:直接接触共培养)

说明由所扩增的细胞分化成的成骨细胞具有较好的成骨能力。将不同培养方式扩增的细胞向软骨细胞诱导分化，分别于第7、14、21天行Toluidineblue染色，以第14、21天染色结果为例，如图3.7所示。‘.’.峨{毅’布勺份、一、‘打一‘·’‘气一l，‘·咨一，."二.;二‘一八....

本文编号：4022699