锌指蛋白ZBTB20的重组腺病毒载体的构建和鉴定

发布时间：2025-02-05 19:37

　　基因转录水平上的调控对基因的表达至关重要，甚至对机体的发育也起到极大的作用。基因表达的调控过程主要发生在转录水平上，转录因子通过其特定的结构域与染色体或其他蛋白质相结合，起到对基因转录的促进或阻碍作用。锌指蛋白是一类具有手指状结构域的转录因子，在基因表达调控、细胞分化、胚胎发育、增强植物抗逆性等方面具有重要的作用[1]。锌指蛋白ZBTB20由741个编码氨基酸组成，N端含有POZ结构域（通常介导蛋白间的相互作用），C端含有5个C2H2锌指结构域（通常介导DNA的结合），与已知的POZ锌指蛋白BCL6和PLZF有30-40％的同源性[1]。利用ZBTB20基因特异性敲除小鼠模型，本实验室揭示了ZBTB20基因在个体发育、物质代谢和神经调控等方面有重要的生理功能[2-6]。尽管如此，关于ZBTB20的生物学功能、其调控的下游靶基因以及介导的信号转导通路仍有许多未明之处。 重组腺病毒是非整合型双链DNA病毒，因而无插入突变，无致癌性，它具有感染分裂期和非分裂期细胞的能力，且易于构建、浓缩和纯化，出毒率较高[7]。我们前期的研究提示ZBTB20在肝脏物质代谢、肝癌的发展中具有重要作用，因此具...

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图12pSilencer-ZB20i9质粒图谱

34图12pSilencer-ZB20i9质粒图谱验动物究选用基因型为F/F的小鼠，即ZBTB20正常表达的小鼠，系景。小鼠在本实验室的SPF级动物房中饲养，室内温度控制在25%-60%。小鼠饲料、垫料均经高温消毒处理，饮水经高温高压灭

图13重组腺病毒的构建、浓缩、纯化和鉴定流程图

图13重组腺病毒的构建、浓缩、纯化和鉴定流程图一）重组腺病毒AdZBTB20shRNA表达载体的构建和、包装、扩增、浓缩纯化及滴度测定pSilencer-ZB20i9质粒和载体pAdTrack-CMV的酶切pSilencer-ZB20i9质粒经KpnI/N....

本文编号：4030344