人类肠道病毒68型3A蛋白可溶区的表达及其结构初步研究

发布时间：2017-05-28 19:08

  本文关键词：人类肠道病毒68型3A蛋白可溶区的表达及其结构初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：为了解人类肠道病毒68型3A蛋白可溶区的结构,本研究构建了EV-D68 3A蛋白可溶区的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化并对其结构进行了初步研究。首先,采用PCR的方法扩增EV-D68 3A(1~61)基因片段,克隆至原核表达载体pET-28a-His-SUMO中,转化进入BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达出His-SUMO-3A(1~61)融合蛋白。经Ni-NTA树脂亲和层析初步纯化后得到大量融合蛋白,利用ULP酶酶切去除His-SUMO标签,通过Ni-NTA树脂亲和层析、阴离子交换层析柱、分子筛层析等方法分离标签并进一步纯化目的蛋白。最后通过化学交联反应检测目的蛋白的多聚化状态。结果显示,利用pET28a-His-SUMO-3A(1~61)原核表达载体能够在大肠杆菌中成功表达出大量可溶性的融合蛋白;经过多步纯化方法得到了大量高纯度的目的蛋白,平均每升大肠杆菌可得到约5mg目的蛋白,纯度达95%以上;通过化学交联反应证明了该蛋白的多聚化存在形式。本研究成功建立了EV-D68 3A蛋白可溶区的表达和纯化系统,为进一步获得3A蛋白晶体、研究3A蛋白功能以及设计以3A为靶点的抗病毒药物奠定了基础。
【作者单位】： 天津大学生命科学学院;
【关键词】： 肠道病毒型 非结构蛋白 A蛋白 蛋白表达与纯化 交联反应
【基金】：国家科技重大专项资助项目2013ZX10001-005
【分类号】：R373.2
【正文快照】： 肠道病毒68型(Enterovirus 68,EV-D68)自1962年首次被发现[1]以后仅引起过较为罕见的病例。然而,2000年以后出现了增加的趋势,到2014年全球多个国家如美国、加拿大、中国等地出现了肠道病毒68型的暴发性感染,引起了人们对这一病毒的关注[2-9]。EV-D68属于小RNA病毒科,肠道病毒

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 陈勇;高友鹤;;化学交联技术在蛋白质相互作用研究中的应用[J];生命的化学;2008年04期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 陆俭;李萍;马亚茹;李刚;陈勇;蒋琳;;恶性疟原虫环子孢子蛋白四肽重复序列单克隆抗体的制备[J];中国生物制品学杂志;2015年10期

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 吕荣;1.虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ的生物素标记与受体分析 2.过甲酸氧化辅助酶解在质膜蛋白质组学中的应用[D];湖南师范大学;2009年

2 石晶;棉秆作为生物降醛材料的工艺及机理研究[D];南京林业大学;2012年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 叶予;;研究获得肠道病毒71型精确结构[J];前沿科学;2013年01期

2 陈姝蒙;丁峥嵘;赵智娴;罗梅;田炳均;汤晶晶;张杰;陆林;;云南省2012年边境地区健康儿童肠道病毒监测及基因特征分析[J];中国病毒病杂志;2013年03期

3 马子行;沈美s，

本文编号：403266