不同消化时间对原代心肌细胞的影响

发布时间：2017-05-29 05:12

  本文关键词：不同消化时间对原代心肌细胞的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的原代心肌细胞培养是一项重要的体外实验技术,为建造心血管疾病相关模型提供了重要的基础保障。文中旨在通过探讨不同消化时间对原代心肌细胞培养的影响,得到一套简便易行并且能获得较高成活率、纯度及活性的原代心肌细胞的培养方法。方法采用单消化酶多次消化心肌组织,根据消化时间分为8 min组和10 min组,差速贴壁法和5-溴-2-脱氧尿苷抑制法获得纯度较高的心肌细胞。光学显微镜下观察心肌细胞形态,记录镜下不同区域心肌细胞搏动频率测定细胞活力。用台盼蓝染色法检测培养细胞的存活率,横纹肌肌动蛋白鉴定心肌细胞。最后建立心肌细胞肥大模型,比较实验组(血管紧张素Ⅱ)和对照组[10%FBS DMEM(H+)培养基]的细胞截面平均面积。结果与8 min组比较,10 min组原代心肌细胞大部分伸出伪足相互接触交织成网,逐渐形成细胞簇,立体感明显,细胞搏动及收缩更为明显而有力。分离纯化后原代心肌细胞的平均存活率均90%,10 min组平均存活率显著高于8 min组[(95.4±0.8)%vs(93.0±0.8)%,P0.05]。α-actin免疫细胞化学染色鉴定,8 min组和10 min组原代心肌细胞的阳性率均95%。血管紧张素Ⅱ作用48 h后,10 min组原代心肌细胞实验组心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、细胞截面平均面积较对照组表达均显著升高[(20.8±0.7)vs(15.8±0.5),(34.77±8.43)μm2vs(14.11±4.29)μm2,P0.05],而消化时间为8 min的原心肌细胞截面平均面积和ANP值未见显著变化。结论采用消化时间为8 min的原代心肌细胞培养方法具有简便、省时、易操作等特点,最重要的是能够获得较高质量的心肌细胞。
【作者单位】： 包头医学院研究生院;包头医学院第二附属医院心内科;
【关键词】： 原代细胞培养 心肌细胞 消化温度 消化酶 消化时间
【基金】：国家自然科学基金(81160033,81460068) 内蒙古自治区自然科学基金(2014MS0888)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 0引言原代心肌细胞培养是一项重要的体外实验技术,其为建造心血管疾病发生发展过程的模型及探讨基因、蛋白质及信号通路的变化提供重要的基础保障。此外,在体内心肌细胞的活动受到神经、体液等多方因素的影响,限制对其病理变化的过程的研究。而体外培养的原代心肌细胞不仅具有

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本文编号：404234