曲古霉素A对小鼠骨髓源性树突状细胞表型和功能的影响

发布时间：2017-05-30 01:01

  本文关键词：曲古霉素A对小鼠骨髓源性树突状细胞表型和功能的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：未成熟树突状细胞（immature dendritic cells, imDCs）诱导免疫耐受的作用越来越受到重视，如何保持其未成熟状态成为研究热点。本文旨在研究曲古霉素A（Trichostatin A,TSA）对小鼠骨髓源性树突状细胞表型和功能的影响。 方法：取小鼠骨髓前体细胞，在含重组小鼠粒/巨细胞刺激因子（recombinant mousegranulocyte-macrophage colony-stimulating factor, rmGM-CSF）和重组小鼠白介素-4（recombinant mouse interleukin4,rmIL-4）完全培养基中诱导其向DCs分化，于第6天收集疏松贴壁细胞分为4组：空白组（不添加任何药物）、TSA组(加入100ng/mlTSA)、LPS组（加入100ng/ml LPS）、LPS+TSA组（分别加入上述药物），继续培养48h后收集细胞。倒置显微镜观察不同时间段细胞形态学变化。收集上述4组诱导培养至第8天疏松半贴壁细胞，PBS洗涤后调整细胞浓度5×106/ml，取100ul悬液加入流式试管中，加入FITC标记CD86、CD80单克隆抗体各0.5ug，同型对照组分别加入相应的同型对照抗体，4℃静置避光30min,PBS再次洗涤后上流式细胞仪测定各组DCs表面CD86、CD80的表达情况。混合淋巴细胞增殖实验检测（MTT法）4组诱导培养至第8天的DCs对异基因T淋巴细胞增殖能力的影响。ELISA检测各组培养至第8天的细胞上清液IL-12、IL-10分泌的变化。 结果：倒置显微镜观察，，刚开始前体细胞体积较小，呈圆形贴壁生长。随着培养时间的延长，胞体增大，变成椭圆形或不规则，至第2天有少量DCs集落生成，第4天DCs集落增多、增大，继续培养至第6天见DCs集落呈疏松贴壁悬浮状态生长，集落周围有树突样悬浮细胞出现，呈典型DCs形态；流式细胞仪结果显示经TSA处理后，DCs表面分子CD86、CD80表达均低于其它各组（P0.05），尤其较LPS组降低更明显；混合淋巴增殖实验显示TSA诱导的DCs显著降低同种异基因T淋巴细胞增殖能力，提示DCs抗原提呈能力受损；ELISA检测结果表明TSA能显著提高树突状细胞分泌Th2型细胞因子IL-10（P0.05），与此同时对Th1型细胞因子IL-12分泌量抑制显著（P0.05）。 结论：TSA能够抑制树突状细胞的成熟和诱导未成熟树突状细胞的产生。该DCs不能被促炎因子激活，稳定保持耐受性表型特征，因此其诱导的DCs在今后炎症性疾病和器官移植排斥反应等方面具有广泛应用前景。
【关键词】：曲古霉素A 树突状细胞 混合淋巴细胞反应 免疫功能
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-10
• 材料和方法10-15
• 结果15-21
• 讨论21-25
• 结论25-26
• 参考文献26-29
• 致谢29-30
• 附录30-42
• A 英文缩略词对照表30-31
• B 常用试剂配制31-32
• C 图片及个人简历32-34
• D．综述34-42
• 参考文献40-42

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本文编号：406013