柯萨奇病毒A组16型分离鉴定及感染C57乳鼠致病模型的研究

发布时间：2017-05-30 13:02

  本文关键词：柯萨奇病毒A组16型分离鉴定及感染C57乳鼠致病模型的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：手足口病（Hand-foot-mouthDisease,HFMD）是婴幼儿时期常见的传染病，，以发热和手足口部出现疱疹为主要特征，轻者可以自愈，重者可合并脑炎、无菌性脑膜炎、肺水肿等，甚至死亡。1957年首例HFMD在多伦多被报道，第2年从HFMD患儿标本中分离出CVA16病毒，1972年，美国加利福尼亚州爆发的HFMD疫情，分离出了EV71病毒。自此以来，世界范围内每年都会发生该病的流行，常以大范围散发、局部爆发的形式存在，发病率和死亡人数逐年攀升。我国1981年自上海首次发现HFMD病例[1,2]，HFMD在全国范围内迅速蔓延，其中天津于1983年、1986年两次发生HFMD爆发流行，1998年中国台湾省爆发的HFMD共监测到129106病例，死亡78例，2011年全国累计报告手足口病病例1496048例，其中重症17775例，死亡467人。据统计每隔2～3年就有一次大流行，每年的感染病例在100万以上[3]。2008年5月2日卫生部将HFMD纳入丙类法定传染病[4]，HFMD已成为危害我国社会安全的重大公共卫生问题。 引起HFMD的病原体有20多种，CVA16和EV71是主要的病原体。EV71感染常常并发病毒性脑膜炎、脑炎、肺水肿、肺出血等严重并发症，可导致婴幼儿的快速死亡，故对于EV71的相关报道较多。且据往年的资料显示，EV71在中国大部分地区的重症发病率大于CVA16。因此，中国对于HFMD的研究主要集中于EV71，包括药物及疫苗的研究。相对EV71而言，CVA16所致的HFMD症状较温和，且较少发生并发症，在以往的研究中常作为HFMD的辅助检测项目。但近年有报道，CVA16可能与心肌炎、难治性休克等致死性并发症相关。在中国近年的HFMD流行中，CVA16的发病率有升高的趋势，在某些地区甚至超过EV71成为优势血清型。从发病时间和地区来看，形成CVA16和EV71交替或混合共流行的局面。且在临床中二者的感染不易区分。因此，加强对我国不同地区CVA16的病毒分离鉴定、致病机制及疫苗研究对防控HFMD具有重要意义。 目的分离鉴定我国不同地区引起HFMD流行的柯萨奇病毒A组16型(CoxsackievirusA16,CVA16)病毒株，建立流行株感染乳鼠动物模型，为深入探索CVA16病毒致病机制，以加速预防疫苗研制、药物筛选进程奠定基础。 方法（1）从我国北京、天津、山东、福建等地收集147份HFMD临床样本，用Vero细胞分离病毒，并进行RT-PCR鉴定，对CVA16的基因及毒力特点做出分析；（2）将CVA16分离株经过蚀斑纯化、乳鼠适应后，获得一株能致死11日龄C57乳鼠的CVA16毒株，命名为TS10/08（GenBankJX068829）。随后将TS10/08感染11日龄C57乳鼠，观察并记录感染乳鼠体重变化、临床得分及死亡率变化，并通过实时定量RT-PCR测定脑、骨骼肌、肺、心肌的病毒载量，检测组织病理、炎症分子变化，建立CVA16感染乳鼠模型。 结果（1）从我国不同地区来源的147份HFMD临床样本中，成功分离出16株CVA16、20株EV71、5株CVA16和EV71混合感染株，测定CVA16滴度是10-5～10-9，进一步测定7株CVA16的全基因组序列，并提交至GenBank，基于VP1核苷酸序列构建进化树，结果显示全部分离株都属于C1亚型，均为我国主要流行株；（2）将TS10/08CVA16病毒株腹腔注射感染1～14日龄C57乳鼠，结果显示，该TS10/08CVA16病毒株可致死11日龄内C57乳鼠，测定病毒毒力为50LD50/mL。对TS10/08CVA16感染乳鼠测定病毒载量，显示感染后骨骼肌中病毒载量持续高于心肌、肺、脑中，而心肌、肺、脑中病毒载量差别不大。6天发病高峰时做病理检测，发现骨骼肌、心肌、脑、肺中都有淋巴细胞浸润，但骨骼肌中最为严重，且CVA16病毒感染期间MCP-1，MIP-1alpha，CSF3和MIP-1beta炎性分子显著升高，推测炎性分子在CVA16感染HFMD中发挥着重要作用。 结论从147份HFMD临床样本中分离得到了16株CVA16流行病毒株，并完成了7株全基因组序列测定和13株VP1序列测定，阐明了CVA16基因的特征；筛选出一株乳鼠适应株TS10/08，建立了CVA16感染乳鼠模型，为进一步深入阐明免疫致病机制、研发预防疫苗和治疗药物奠定了基础。
【关键词】：手足口病 CVA16 C57乳鼠 感染模型
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373.23;R-332
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-9
• 中英文缩略词表9-11
• 前言11-16
• 第一章 CVA16的分离鉴定16-36
• 材料与方法16-25
• 实验结果25-34
• 讨论34-35
• 小结35-36
• 第二章 CVA16感染C57乳鼠致病模型的研究36-56
• 材料和方法36-49
• 实验结果49-54
• 讨论54-55
• 小结55-56
• 总结56-57
• 附件57-61
• 参考文献61-67
• 综述67-78
• 参考文献74-78
• 致谢78-79
• 攻读硕士研究生期间发表的文章79-80
• 个人简历80

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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2 杨文升;;104例儿童重症手足口病的临床特征分析[J];重庆医学;2011年17期

3 贾蕾;赵成松;张莉;李爽;张代涛;刘白薇;王全意;黎新宇;;肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型感染的手足口病患儿的相关特征对比研究[J];中国当代儿科杂志;2011年08期

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7 武珊;王文瑞;海岩;;柯萨奇病毒A组16型研究进展[J];疾病监测与控制;2011年08期

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本文编号：407147