幽门螺杆菌感应调节蛋白CrdR的原核表达及其在酸适应调控中的作用

发布时间：2017-05-31 00:00

  本文关键词：幽门螺杆菌感应调节蛋白CrdR的原核表达及其在酸适应调控中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 原核表达幽门螺杆菌26695标准株的感应调节蛋白CrdR，并初步探讨其在酸适应调控中的作用，为从细菌适应环境的生理角度探索抗感染的新途径提供实验材料和实验依据。 方法 以提取的幽门螺杆菌26695标准株基因组DNA为模板，PCR扩增hp1365基因；将其克隆至载体pGEX-6P-1中，构建pGEX-hp1365载体，通过双酶切和DNA测序鉴定后，转化E.coli JM109，IPTG诱导表达；表达产物经SDS-PAGE分析、Western blot鉴定；目的蛋白大量表达后经亲和层析法纯化，免疫家兔制备抗重组CrdR蛋白的兔免疫血清，通过Western blot分析CrdR蛋白在不同pH条件下的表达量，探讨CrdR调节蛋白在幽门螺杆菌酸适应调控中的作用。 结果 经PCR扩增的hp1365基因全长642bp，与hp1365基因大小一致；重组表达质粒pGEX-hp1365经双酶切和DNA测序鉴定，插入的片段与hp1365基因序列完全一致；SDS-PAGE分析表达的重组蛋白相对分子质量约为25KDa，蛋白含量为60%，以包涵体形式表达；Western blot鉴定为CrdR蛋白；制备了抗重组CrdR蛋白的兔免疫血清；Western blot分析显示，，在不同pH培养条件下，幽门螺杆菌CrdR蛋白在pH5的培养基条件下表达量最高，并随着pH增高其表达量呈递减趋势。 结论 成功原核表达了幽门螺杆菌26695标准株CrdR蛋白，该蛋白在幽门螺杆菌酸适应中起到调控作用，为进一步探讨CrdR的作用机制和通过阻断CrdR抗幽门螺杆菌感染的措施提供了实验材料。
【关键词】：幽门螺杆菌 CrdR 蛋白 原核表达 酸适应 调控
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378.2
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-13
• 第一部分 幽门螺杆菌感应调节蛋白 CrdR 的原核表达13-29
• 1 材料与方法13-25
• 2 结果25-27
• 3 讨论27-29
• 第二部分 幽门螺杆菌感应调节蛋白 CrdR 在酸适应调控中作用的初步探讨29-40
• 1 材料与方法29-35
• 2 结果35-38
• 3 讨论38-40
• 全文总结40-41
• 参考文献41-44
• 文献综述44-51
• 参考文献48-51
• 致谢51-52
• 攻读硕士研究生期间发表的文章及参加的学术会议52-53

【参考文献】

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1 成虹;胡伏莲;谢勇;胡品津;王吉耀;吕农华;张建中;张桂英;周曾芬;吴克利;张玲霞;彭孝伟;戴宁;唐国都;姜葵;李岩;侯晓华;白文元;王明春;叶红军;刘玉兰;许乐;;中国幽门螺杆菌耐药状况以及耐药对治疗的影响—全国多中心临床研究[J];胃肠病学;2007年09期

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本文编号：408163