EPO预处理对LIR大鼠肝脏微循环的保护

发布时间：2017-05-31 07:13

  本文关键词：EPO预处理对LIR大鼠肝脏微循环的保护，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的通过建立大鼠双后肢肢体缺血再灌注损伤（1imb Ischemia ReperfusionInjury，LIRI）模型，观察促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）预处理对LIRI后的大鼠肝脏及肝脏微循环的保护作用。探究缺血再灌注损伤（IschemiaReperfusion Injury，IRI）后活体的大鼠肝脏微循环血流量变化、肝脏组织中内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）蛋白含量水平的区别、氧化应激（Oxidative Stress）损伤程度、肝脏组织形态变化等。探讨这一系列变化与EPO对肝脏微循环保护作用的相关性，初步证明EPO预处理在LIRI中对肝脏微循环的保护作用。 方法实验用45只健康成年雄性SD大鼠，制作大鼠双后肢缺血再灌注模型。采用随机数表法将大鼠平均分为3组（n=15）：对照组（Control组）；缺血再灌注组（IR组）；EPO预处理组（EPO+IR组）。本实验采用缺血4小时，再灌注2小时的方法。于再灌注前30min对EPO+IR组的大鼠腹腔注射重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin，rhEPO）3000U/kg，Control组和IR组大鼠则腹腔注射等量的生理盐水。用激光多普勒活体观察各组大鼠肝脏微循环血流量改变情况；光学显微镜观察HE染色后的大鼠肝脏组织的形态变化；检测血浆中谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）含量；血浆和肝脏组织中超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，SOD）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量；免疫组织化学染色观察肝脏组织中eNOS的表达情况；蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测肝脏组织中eNOS蛋白的表达水平。 结果1）激光多普勒活体观察各组大鼠肝脏微循环血流量，IR组较Control组肝脏微循环血流量明显降低，EPO+IR组肝脏微循环血流量虽也一定程度上降低，但是明显高于IR组。提示EPO预处理提高了LIRI后肝脏微循环血流量。2）HE染色观察到大鼠肝脏组织，，Control组肝脏组织形态结构基本正常，IR组动物肝小叶结构紊乱，肝血窦变窄，部分肝组织出现肝血窦及中央静脉不同程度的淤血，炎细胞浸润等病理改变，EPO+IR组中各种病理改变较IR组减轻。3）与Control组相比，IR组和EPO+IR组血浆中ALT、AST水平均明显升高（P＜0.01），但EPO+IR组血浆中ALT、AST水平较IR组均有所降低（P＜0.01）。说明EPO预处理组的肝脏功能一定程度上得到了保护。4）与Control组相比，IR组和EPO+IR组的肝脏组织和血浆中SOD活力下降明显（P＜0.01），MDA含量明显升高（P＜0.05）。但EPO+IR组较IR组SOD活力升高（P＜0.05），MDA含量降低（P＜0.05）。提示EPO预处理减轻了脂质过氧化反应。5）肝脏免疫组织化学染色显示，IR组和EPO+IR组肝脏组织中均有eNOS蛋白棕黄色染色颗粒（P＜0.01），EPO+IR组较IR组棕黄色染色更为明显（P＜0.05）。6） Western blot实验发现，EPO+IR组肝脏组织中eNOS蛋白表达水平最高，其次是IR组，这两组中eNOS表达水平均高于Control组，且差异具有显著的统计学意义（P＜0.01）。说明EPO在LIRI的肝脏组织中更加促进了eNOS的活化和表达。 结论EPO预处理可以减轻大鼠LIR肝脏的损伤，其机制可能与减轻缺血再灌注后肝脏微循环的损伤，抑制肝脏组织内的氧化应激反应，上调eNOS在肝脏组织中的活化和表达有关。当大鼠发生LIRI时，用EPO预处理可以减轻肝脏组织的病理改变；通过提高SOD活力、降低MDA含量减轻氧化应激反应；促进eNOS的活化，上调P-eNOS的表达，相对增加肝脏微循环的血流量。从而发挥对肝脏微循环的保护作用。
【关键词】：促红细胞生成素 缺血再灌注损伤 微循环 内皮型一氧化氮合酶 肝脏
【学位授予单位】：河北联合大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略表10-11
• 英文缩略表 续表11-12
• 引言12-14
• 第1章 实验研究14-50
• 1.1 材料与方法14-26
• 1.1.1 实验材料14-17
• 1.1.2 实验方法17-26
• 1.2 结果26-37
• 1.2.1 各组动物激光多普勒测定肝脏微循环血流量的比较26
• 1.2.2 HE 染色肝组织病理形态改变26-29
• 1.2.3 各组动物血浆 AST、ALT 浓度的比较29
• 1.2.4 各组动物血浆 MDA、SOD 值的比较29-32
• 1.2.5 各组动物肝组织 MDA、SOD 值的比较32-33
• 1.2.6 大鼠肝脏组织 eNOS 免疫组化染色结果分析33-36
• 1.2.7 肝脏组织 eNOS 蛋白 Western-Blot 检测结果36-37
• 1.3 讨论37-45
• 1.3.1 关于大鼠肢体缺血再灌注模型的建立和肢体的微循环血流量变化37-38
• 1.3.2 EPO 的的生物学特性及作用38-39
• 1.3.3 EPO 对 LIR 后肝脏微循环的保护作用及可能机制39-41
• 1.3.4 EPO 对 LIR 后肝脏的保护机制41-45
• 1.4 结论45
• 1.5 展望45-46
• 参考文献46-50
• 第2章 综述内皮型一氧化氮合酶对缺血再灌注组织微循环的影响50-58
• 2.1 一氧化氮及一氧化氮合酶50-51
• 2.2 eNOS 的活化51-53
• 2.2.1 细胞内 Ca2+和钙调蛋白51-52
• 2.2.2 磷酸化52
• 2.2.3 巯基亚硝基化52-53
• 2.3 eNOS 在微循环中的作用53-55
• 2.3.1 eNOS 对微血管的调节53
• 2.3.2 eNOS 与其他细胞因子的相互作用53-54
• 2.3.3 eNOS 与氧化应激反应54-55
• 2.3.4 eNOS 抑制白细胞和血小板的聚集粘附55
• 2.4 小结55-56
• 参考文献56-58
• 致谢58-59
• 导师简介59-60
• 作者简介60-61
• 学位论文数据集61

【参考文献】

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本文编号：408874