两种方法分离免疫细胞用于高通量测序TCR组库分析的比较

发布时间：2017-06-01 11:11

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【摘要】：目的探讨两种方法分离免疫细胞进行高通量T细胞表面的T细胞变体(TCR),组库分析的区别及可行性。方法分别采用免疫磁珠分选纯化CD3阳性T细胞和Ficoll-Paque梯度离心法分离外周血淋巴细胞的方法制备TCR测序所需样品各1例,提取DNA后多重聚合酶链式反应(PCR)扩增CDR3区域,将扩增得到的PCR产物纯化后构建免疫组库,进行高通量测序及生物信息学分析。结果两种方法获得的免疫细胞提取DNA后均能够满足TCR免疫组库建库需要,高通量测序结果显示互补决定簇3(CDR3)区域长度呈高斯分布,来自健康志愿者的TCR具有丰富多样性,肿瘤患者TCR多样性呈寡克隆分布。结论纯化的T细胞或者直接分离得到的淋巴细胞均可用于免疫组库构建及后续TCR CDR3受体库高通量测序分析,TCR CDR3多样性可能直接反应机体免疫状态。
【作者单位】： 首都医科大学附属北京世纪坛医院肿瘤内科;
【关键词】： T细胞受体 高通量测序 互补决定簇
【基金】：国家自然科学基金面上项目(C81172534)
【分类号】：R392
【正文快照】： T细胞表面的T细胞受体(T cell receptor,TCR)是识别抗原的关键分子,具有庞大的多样性,以适应对于不同抗原的识别。TCR最大量多样性的产生主要来自于连接时,在V(D)J连接区核苷酸的插入和删除,体现为互补决定区簇3(complementarydetermining region 3,CDR3)序列多样性,因此,TCR

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