肺炎链球菌组氨酸激酶（VicK）中药单体抑制剂的抗菌作用研究

发布时间：2017-06-01 19:00

  本文关键词：肺炎链球菌组氨酸激酶（VicK）中药单体抑制剂的抗菌作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 双组份系统VicR/VicK是肺炎链球菌中唯一一个与细菌生存相关的TCS系统,调控着维持细胞壁稳态的基因表达，而且调节细菌对抗生素的耐药性。其中VicK为含449个氨基酸的组氨酸激酶受体，负责接收外界信号刺激并将信号传递给VicR，被认为是筛选抗菌药物的良好作用靶点。 目前已有多篇以VicK为靶点筛选抗菌药物的文章报道，本课题组以前也以该靶点筛选出6个具有抗肺炎链球菌作用的小分子化合物。而中药单体作为我国传统药物，来源广泛且副作用小，是很好的抗菌药物筛选库，实验室前期以肺炎链球菌VicK为靶点通过计算机虚拟筛选获得96种中药单体，本研究将对这些化合物的抗菌作用进行体内外验证，同时对其相关作用机制进行初步研究。 方法 通过原核表达技术从大肠杆菌中表达S.pn VicK全长蛋白，经Western blot分析VicK在6种不同血清型肺炎链球菌中的保守性并通过试剂盒检测其激酶活性。然后利用具有活性的VicK蛋白对化合物进行体外筛选，，以抑制VicK蛋白激酶活性的化合物进行随后的抑菌实验。采用最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）评估化合物的体外抗菌，利用细胞毒性试验评价其细胞毒性，采用小鼠S.pn鼻咽部定植模型和败血症模型评估化合物体内抗菌作用，分别以感染部位细菌载量和生存率为评价指标。采用微量棋盘稀释法检测其与传统抗菌药是否具有协同效应，并从细菌形态变化和生物膜形成的角度初步探索其抗菌的机制。 结果 试验中的5种中药单体化合物为：甲硫腺苷、octanal2,4-dinitrophenylhydrazone、去氧紫草素、麻醉椒苦素、没食子酸月桂酯，其对VicK的ATPase酶活性具有显著的抑制效应，抑制率均大于50%。体外抑菌作用结果显示，这5中化合物对肺炎链球菌的MIC分别为37.1,38.5,17,68.5, and21μg/mL，而体内抗菌实验结果显示，5种化合物均能显著延长感染小鼠的生存时间。同时这5种化合物对耐药性肺炎链球菌、变形链球菌、缓症链球菌、化脓链球菌假肺炎均具有抗菌作用，其中去氧紫草素和没食子酸月桂酯对MRSA也有显著抗菌作用。抗菌机制研究实验结果显示，在sub-MIC下，5种化合物都能抑制细菌细胞分裂和生物膜的形成。传统抗菌药增效实验结果显示，去氧紫草素和没食子酸月桂酯与青霉素、红霉素和四环素都有协同作用，能够降低耐药型19F、19AS.pn在鼻咽部和肺部的定植。细胞毒性试验显示5种化合物的细胞毒性较低。 结论 5种中药单体化合物为VicK蛋白抑制剂，具有显著的体内外抗链球菌的活性，且对青霉素、红霉素和四环素都有一定的增效作用，为新的具有一定广谱性的抗菌先导化合物，在治疗链球菌感染特别是耐药性链球菌感染中有一定的应用前景。
【关键词】：肺炎链球菌 中药单体 抗菌作用 VicK组氨酸激酶
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R378.1
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 第一部分 肺炎链球菌组氨酸激酶 VicK 蛋白的全长表达及其保守性分析15-24
• 1 实验材料15-16
• 2 实验方法16-18
• 3 实验结果18-22
• 4 讨论22-24
• 第二部分 中药单体对 VicK 蛋白激酶活性的抑制作用及抗菌作用验证24-32
• 1 实验材料24-25
• 2 实验方法25-26
• 3 实验结果26-30
• 4 讨论30-32
• 第三部分 VicK 抑制剂的抗菌机制及对传统抗菌药的增效作用研究32-42
• 1 实验材料32-33
• 2 实验方法33-34
• 3 实验结果34-40
• 4 讨论40-42
• 全文总结42-43
• 参考文献43-46
• 文献综述46-54
• 参考文献50-54
• 致谢54-55
• 攻读学位期间发表的学术论文题录55-56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：413234